紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物逆轉(zhuǎn)人卵巢癌A2780-Taxol裸鼠移植瘤紫杉醇耐藥性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物靶向性和有效性的評估
　　目的:
　　構(gòu)建人卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，觀察紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物在體模式下的靶向性和有效性。
　　方法:
　　1.建立裸鼠卵巢癌A2780/Taxol移植瘤模型。
　　2.裸鼠成瘤后第1、8、15日尾靜脈注射藥物[紫杉醇組(PTX):紫杉醇150nmol/kg;奧曲肽組(OCT):奧曲肽150nm

2、ol/kg;聯(lián)用組(PO):紫杉醇150nmol/kg+奧曲肽150nmol/kg;偶聯(lián)物組(POC):紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物150nmol/kg;對照組(Control):尾靜脈注射0.1ml生理鹽水]。
　　3.尾靜脈注射熒光標(biāo)記的偶聯(lián)物(FITC-POC，150nmol/kg)后0.5h、8h、24h、72h活體成像系統(tǒng)下觀察藥物靶向性。
　　4.末次給藥后一周處死裸鼠，測量瘤體體積和重量，計(jì)算藥物治療的抑瘤率。

3、　　5.HE染色觀察移植瘤及荷瘤小鼠肝、腎、脾和尾等各器官形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果:
　　1.入選實(shí)驗(yàn)裸鼠均在接種后10天成瘤（約1 cm3），各實(shí)驗(yàn)組裸鼠均未觀察到精神萎靡、活動遲緩及腹瀉等情況。
　　2.紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物的靶向性良好，8h腫瘤內(nèi)藥物濃度呈現(xiàn)明顯的濃聚，24h達(dá)到高峰。
　　3.紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物可以抑制移植瘤生長，給藥組瘤重、瘤體積均低于對照組（P＜0.05），且POC組明顯低于PTX、O

4、CT和PO組(P＜0.05）。
　　4.HE染色見成瘤組織符合人卵巢癌形態(tài)學(xué)特征，各實(shí)驗(yàn)組均可見不同程度腫瘤組織內(nèi)壞死、炎性細(xì)胞浸潤及纖維化形成，伴少量細(xì)胞核固縮、裂解，說明腫瘤組織生長受到抑制。其中PO及POC組效應(yīng)較其他組明顯。此外，各實(shí)驗(yàn)組裸鼠肝、腎、脾等器官未見明顯改變，且尾部無靜脈炎樣改變，說明紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物對卵巢腫瘤外組織毒性低。
　　結(jié)論:
　　POC對卵巢癌組織靶向性良好，可以有效抑制A2780/

5、Taxol裸鼠移植瘤的生長。
　　第二部分 紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)物逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥機(jī)制分析
　　目的:
　　在第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究POC對移植瘤組織SSTR2、MDR1、VEGF、MMP-9、α微管蛋白和βⅢ微管蛋白mRNA和蛋白表達(dá)的影響，探討其靶向治療作用的可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.免疫組化法檢測移植瘤組織SSTR2亞型的分布及表達(dá)。
　　2.Real-time PCR法分別檢測

6、移植瘤組織SSTR2、MDR1、VEGF、MMP-9、Tubα1a和Tubβ3 mRNA表達(dá)情況。
　　3.Western Blot法分別檢測移植瘤組織SSTR2、MDR1、VEGF、MMP-9、α微管蛋白和βⅢ微管蛋白的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化檢測顯示，移植瘤組織SSTR2表達(dá)呈陽性，主要分布于包膜及胞漿。
　　2.Real-time PCR檢測顯示，各給藥組SSTR2 mRNA表達(dá)均高于對

7、照組，而MDR1、VEGF、MMP-9、Tubα1a和Tubβ3 mRNA均低于對照組(P＜0.05），其中POC組SSTR2表達(dá)高于PTX、OCT和PO組，而MDR1、VEGF、MMP-9、Tubα1a和Tubβ3表達(dá)均低于PTX、OCT和PO組（P＜0.05)。
　　3.Western Blot檢測顯示，各給藥組SSTR2蛋白表達(dá)均高于對照組，而MDR1、VEGF、MMP-9、α微管蛋白和βⅢ微管蛋白均低于對照組(P＜0.05