納米銀對多重耐藥鮑曼不動桿菌的抗菌機制研究.pdf

1、目的:
　　多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDRAB）引起的感染日益增多，給臨床抗感染治療帶來極大困難。納米銀作為一種新型抗菌劑，具有廣泛的抗菌活性和強大的抑菌、殺菌作用，且無耐藥性，安全性高，但其確切的抗菌機制目前尚不十分明確。本課題組前期研究表明，納米銀可促進大腸埃希菌的中晚期凋亡，抑制大腸埃希菌的增殖，且凋亡的程度與納米銀的濃度呈正相關(guān)，這是首次從細菌凋亡和增殖的角度闡述了納米銀的抗菌機制。本文旨在探討納米銀是否對臨床分離的多重耐藥

2、鮑曼不動桿菌有抗菌作用，并探索其是否通過誘導(dǎo)細菌產(chǎn)生凋亡和抑制細菌增殖，抵抗多重耐藥細菌的生長，從而為納米銀抵抗多重耐藥菌的機制研究提供一個新的方向，對納米銀未來的抗菌應(yīng)用具有重要意義。
　　方法:
　　收集38株臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌，進行來源病區(qū)和標(biāo)本種類的統(tǒng)計分析；應(yīng)用Vitek2 Compact全自動微生物分析系統(tǒng)對多重耐藥鮑曼不動桿菌進行鑒定及藥敏試驗，并分析抗生素耐藥率；使用多重聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法和

3、單一 PCR法檢測鮑曼不動桿菌攜帶的耐藥基因 blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58、blaIMP、blaGIM、blaVIM、blaNDM-1、blaKPC、blaGES及插入序列ISAba1、ISAba4、ISAba125；利用ERIC2-PCR法對臨床分離株進行基因分型及同源性分析；選取3株造成血流感染的多重耐藥鮑曼不動桿菌，并參照參考文獻確定納米銀的實驗濃度，即10μg/ml和20μg/m

4、l，通過計數(shù)CFU實驗繪制多重耐藥鮑曼不動桿菌的生長曲線，確定納米銀對此耐藥菌株生長的影響；應(yīng)用電子顯微鏡觀察納米銀對菌株形態(tài)的影響；采用流式細胞術(shù) Annexin V-PI雙染色法檢測納米銀是否引起多重耐藥鮑曼不動桿菌凋亡及凋亡的比例，并應(yīng)用Flowjo和GraphPad Prism軟件分析數(shù)據(jù)；應(yīng)用BrdU ELISA方法檢測納米銀對多重耐藥鮑曼不動桿菌增殖的影響，并用GraphPad Prism軟件統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:

5、
　　1.本研究收集的多重耐藥鮑曼不動桿菌菌株主要來源于重癥監(jiān)護病房，耐藥性強，均攜帶耐藥基因blaOXA-23和blaOXA-51及插入序列ISAba1，ERIC2-PCR基因分型結(jié)果顯示來源于同一克隆株。
　　2.分離自血流感染的3株多重耐藥鮑曼不動桿菌經(jīng)納米銀處理后生長速率降低，并且加入的納米銀濃度越高，這種降低的趨勢越明顯，推測其原因可能是納米銀誘導(dǎo)多重耐藥鮑曼不動桿菌凋亡或者納米銀抑制多重耐藥鮑曼不動桿菌增殖。

6、r>　　3.通過透射電鏡觀察納米銀對多重耐藥鮑曼不動桿菌菌體形態(tài)的影響，發(fā)現(xiàn)納米銀處理后的多重耐藥鮑曼不動桿菌核酸發(fā)生了凝集，而菌體的形態(tài)保持完整，納米銀并未使多重耐藥鮑曼不動桿菌的細胞壁和細胞膜發(fā)生物理性的破壞。
　　4.應(yīng)用Annexin V-PI雙染法和流式細胞術(shù)檢測納米銀對多重耐藥鮑曼不動桿菌凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)3株多重耐藥鮑曼不動桿菌經(jīng)納米銀處理后，Annexin V染色陽性率均增加，并且這種凋亡增加的趨勢隨著加入納米銀濃度

7、的升高而愈發(fā)明顯。進一步對早期和中晚期凋亡分別統(tǒng)計分析顯示，納米銀誘導(dǎo)多重耐藥鮑曼不動桿菌中晚期凋亡具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.采用 BrdU ELISA方法檢測經(jīng)納米銀處理后的多重耐藥鮑曼不動桿菌新合成 DNA的情況，結(jié)果顯示納米銀處理后，3株多重耐藥鮑曼不動桿菌新生DNA的合成均減少，細菌增殖呈下降趨勢，且這種下降趨勢與加入納米銀的濃度成正相關(guān)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　本研究表明納米銀可以抵抗多重耐藥鮑曼不