鹽霉素對大鼠肝星狀細胞增殖及細胞外基質(zhì)分泌影響的研究.pdf

1、目的：研究鹽霉素在體外對大鼠肝星狀細胞（HSC-T6）增殖及細胞外基質(zhì)（ECM）分泌的影響，并探討其作用的發(fā)揮是否通過抑制Wnt/β-catenin信號通路來實現(xiàn)。
　　方法：以HSC-T6為研究對象，分別用不同濃度的鹽霉素及其溶媒DMSO處理HSC-T6不同時間后，用CCK-8法檢測鹽霉素對HSC-T6細胞增殖的影響，并得出最適濃度及時間，以調(diào)整后續(xù)實驗的藥物濃度。用光學(xué)倒置顯微鏡觀察正常組、溶媒DMSO組及鹽霉素處理組的細胞形

2、態(tài)變化。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)檢測肝纖維化指標(biāo)Ⅲ型前膠原（PCⅢ）及透明質(zhì)酸（HA）的表達情況。用流式細胞儀（PI單染法）測細胞周期。分別采用RT-PCR和Western Blot檢測Wnt/β-catenin信號通路中關(guān)鍵信號分子β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA及蛋白表達水平。
　　結(jié)果：鹽霉素體外抑制HSC-T6增殖，在一定范圍內(nèi)呈劑量、時間依賴關(guān)系，24小時的IC50為27.7μmol/L，以此調(diào)整

3、接下來的處理組濃度分別為15μmol/L、30μmol/L及60μmol/L。光學(xué)倒置顯微鏡下可見處理組細胞縮小，胞核固縮，部分細胞碎裂成片，且隨著鹽霉素濃度增加，形態(tài)改變更加明顯?；瘜W(xué)發(fā)光免疫結(jié)果提示鹽霉素能降低PCⅢ、HA蛋白的表達水平，鹽霉素濃度越大，PCⅢ、HA水平越低。鹽霉素能阻滯HSC-T6于G1期：隨藥物濃度的加大，G1期細胞比例增大，而S期細胞比例減少。鹽霉素能下調(diào)β-catenin、cyclin D1、c-Myc mR