黃曲霉毒素B1間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的研制.pdf

1、黃曲霉毒素B1是目前發(fā)現(xiàn)毒性最強(qiáng)、致癌性最高的化學(xué)物質(zhì)之一，主要是由黃曲霉和寄生曲霉寄生產(chǎn)生的的代謝產(chǎn)物，理化性質(zhì)穩(wěn)定，易于污染，在農(nóng)產(chǎn)品、蔬菜、加工食品、飼料等中常被檢測(cè)出。黃曲霉入侵到食物鏈中，將產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的黃曲霉毒素，人體或動(dòng)物一旦食用將對(duì)機(jī)體產(chǎn)生巨大的危害。目前，世界各國(guó)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品、食品、飼料等中黃曲霉毒素 B1含量都有嚴(yán)格的限制。避免黃曲霉毒素在食物鏈中的污染，不僅僅是在農(nóng)產(chǎn)品原料方面的防控，在農(nóng)產(chǎn)品材料貯藏、食品加工、物流流通環(huán)

2、節(jié)更要進(jìn)行檢測(cè)監(jiān)督。
　　我國(guó)對(duì)黃曲霉毒素B1檢測(cè)技術(shù)的研究工作進(jìn)行了許多年，不同的技術(shù)手段形成檢測(cè)技術(shù)30余種，國(guó)際上權(quán)威的檢測(cè)方法是利用高效液相法進(jìn)行檢測(cè)，我國(guó)也執(zhí)行此項(xiàng)檢測(cè)法，但該方法成本較高、不利于操作，樣品的前處理繁瑣，檢測(cè)流程整體時(shí)間較長(zhǎng)，不利于監(jiān)測(cè)部門對(duì)市場(chǎng)的動(dòng)態(tài)監(jiān)督。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法是利用抗原抗體相互結(jié)合，酶標(biāo)二抗加入后與底物反應(yīng)顯色以確定檢測(cè)物含量的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，該實(shí)驗(yàn)技術(shù)轉(zhuǎn)化為試劑盒產(chǎn)品將形成具有對(duì)樣品的前處

3、理要求低，便于操作，而且能大大縮短檢測(cè)時(shí)間的可推廣化產(chǎn)品。
　　本項(xiàng)目研制的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒，通過(guò)條件的優(yōu)化，確定了所需的包被抗原最佳加入量為50ng/孔，黃曲霉毒素B1單克隆抗體加入量為100ng/孔，二抗稀釋比例為1:500最合適；所研制的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果較高效液相法（HPLC）對(duì)比符合率大于98％，檢測(cè)結(jié)果與國(guó)際認(rèn)可方法一致；試劑盒的準(zhǔn)確度研究采取了檢測(cè)大米、玉米、花生中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)，結(jié)果顯示

4、大米檢測(cè)回收率為：85%-91%，玉米檢測(cè)回收率為：84%-94%，花生檢測(cè)回收率為：88%-92%，回收率均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)回收率70%-120%范圍，說(shuō)明了研制的試劑盒檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度高；試劑盒靈敏度研究，進(jìn)行了對(duì)大米、玉米、花生的檢測(cè)限分析，結(jié)果顯示出該試劑盒對(duì)大米的檢出限為：0.25μg/kg，玉米的檢出限為：0.30μg/kg，花生的檢出限為：0.30μg/kg，說(shuō)明了該試劑盒的檢測(cè)限靈敏且比國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢出限更低更；試劑盒精密的研究