擬南芥VHA-c基因?qū)ι锩{迫和非生物脅迫的響應(yīng).pdf

1、植物液泡H+-ATPase(V-ATPase)是一類特殊的膜結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能夠利用水解 ATP產(chǎn)生的能量將質(zhì)子泵入膜內(nèi)，從而使液泡酸化，其產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度可以用于驅(qū)動離子和代謝物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。已有研究表明V-ATPase中的c亞基對逆境環(huán)境的響應(yīng)更為敏感，因此對c亞基的研究業(yè)已成為熱點(diǎn)。擬南芥c亞基由5個同源基因編碼。本論文承接郭榮起和蘇杰的工作，繼續(xù)篩選突變體植株，并將突變體株系進(jìn)行生物和非生物脅迫實(shí)驗(yàn)，觀察其對各種逆境脅迫的響應(yīng)，具

2、體結(jié)果如下：
　　1.經(jīng)卡那霉素（Kan）篩選得到九株VHA-c3 RNAi沉默突變純合體株系；經(jīng)PCR鑒定得到兩株vha-c3-1純合體植株和四株vha-c3-2純合體植株；經(jīng)雜交處理共得到五個雙突變體株系，即OEA、OEB、RNAiA、RNAiB、RNAiC
　　2.將VHA-c3突變體植株利用半定量RT-PCR和Northern blot檢測目的基因表達(dá)量，所有參與檢測的RNAi沉默突變純合體和T-DNA插入型突變體體

3、內(nèi)的VHA-c3表達(dá)量都有不同程度的下降；通過對VHA-c3 RNAi沉默突變純合體進(jìn)行基因沉默特異性檢測發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)的VHA-c3基因沉默是特異的。
　　3.利用Northern blot檢測VHA-c3在接種Pst avrRpm1和Pst DC3000后表達(dá)量的變化，結(jié)果表明VHA-c3的表達(dá)量隨著接菌時間（0-48hr）的延長而增加，且Pst DC3000所誘導(dǎo)的VHA-c3基因表達(dá)量上調(diào)的時間和幅度明顯晚于和小于Pst av

4、rRpm1。
　　4.利用Northern blot發(fā)現(xiàn) VHA-c3的表達(dá)量會隨著氯化鈉處理時間的延長而升高；VHA-c1RNAi沉默突變純合體、VHA-c3RNAi沉默突變純合體在25mM、50mM、100mM的NaCl處理下根的相對伸長量低于對照株系；VHA-c1RNAi沉默突變純合體、VHA-c3RNAi沉默突變純合體、VHA-c4c2雙沉默突變體在125mM的NaCl處理下種子萌發(fā)率低于對照株系。
　　5. VHA