Notch通路參與調(diào)控膿毒癥免疫抑制過(guò)程中PD-1表達(dá)的研究.pdf

1、目的：免疫抑制是導(dǎo)致膿毒癥患者高病死率的重要因素。PD-1及其配體PD-L1、PD-L2是一類(lèi)重要的共抑制分子，PD-1/PD-L信號(hào)通路的激活可對(duì)免疫系統(tǒng)起負(fù)向調(diào)節(jié)作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明通過(guò)給予PD-1或PD-L1抗體阻斷PD-1信號(hào)通路可以減少膿毒癥導(dǎo)致的淋巴細(xì)胞凋亡，恢復(fù)單核細(xì)胞免疫功能，最終改善膿毒癥小鼠的預(yù)后。本研究中，我們將首先闡明PD-1和PD-L1在膿毒癥休克早期患者中的表達(dá)水平及其與疾病危重程度和預(yù)后的關(guān)系，進(jìn)而探討PD-

2、1表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，從而為膿毒癥免疫治療提供新思路。
　　方法：⑴根據(jù)2012年頒布的《嚴(yán)重膿毒癥與膿毒癥休克治療指南》納入符合膿毒癥休克診斷的患者，在確診24h內(nèi)采集患者外周血7mL，并以健康志愿者為對(duì)照組。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其外周血CD4+T淋巴細(xì)胞及CD14+單核細(xì)胞表面PD-1、PD-L1的表達(dá)水平，比較膿毒癥休克患者與健康志愿者之間以及患者死亡組與存活組之間的PD-1、PD-L1表達(dá)差異；同時(shí)分離獲得兩組人群外周血單個(gè)核細(xì)

3、胞，利用Real-time PCR檢測(cè)單個(gè)核細(xì)胞中Notch通路相關(guān)分子Notch1、Jagged1與Hes1的mRNA水平，并比較其在膿毒癥休克患者與健康志愿者之間以及死亡組與存活組之間的差異。⑵利用人單核細(xì)胞系THP1細(xì)胞構(gòu)建內(nèi)毒素耐受細(xì)胞模型，共分為4組，分別為對(duì)照組，LPS非耐受組，LPS耐受組及LPS耐受+DAPT干預(yù)組（DAPT為Notch信號(hào)通路阻斷劑）。利用Real-time PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中TNF-α、IL-10、

4、PD-1以及Notch通路相關(guān)分子Jagged1、Hes1的mRNA水平，同時(shí)利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)THP1細(xì)胞表面PD-1的表達(dá)水平，進(jìn)而比較各組間PD-1、Jagged1、Hes1、 TNF-α以及IL-10水平的差異。
　　結(jié)果：①與健康志愿者相比，膿毒癥休克早期患者外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞及CD14+單核細(xì)胞表面的PD-1、PD-L1水平均顯著升高（CD4+T淋巴細(xì)胞：21.59％vs6.37%，p<0.001；13.67%

5、vs4.97%,p<0.01；CD14+單核細(xì)胞：14.91%vs6.89%，p<0.01；51.82%vs17.12%，p<0.01）；膿毒癥休克早期患者外周血 CD14+單核細(xì)胞表面 PD-1、PD-L1的水平與APACHEII評(píng)分呈正相關(guān)（r=0.52，p<0.0001；r=0.55，p<0.0001）；與存活組相比，死亡組患者的CD14+單核細(xì)胞表面的PD-1、PD-L1顯著升高（19.13%vs13.79%，p<0.05；60

6、.21%vs45.06%，p<0.01）。②與健康志愿者相比，膿毒癥休克早期患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的Jagged1與 Hes1水平顯著升高。與存活組相比，死亡組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的Jagged1水平顯著升高。③與內(nèi)毒素非耐受組相比，內(nèi)毒素耐受組的IL-10、Jagged1、Hes1以及 PD-1的水平顯著升高，TNF-α的水平顯著降低。④與非干預(yù)組相比，DAPT干預(yù)組的PD-1及IL-10的水平顯著下降。
　　結(jié)論：⑴膿毒癥休