長(zhǎng)鏈非編碼RNA SPRY4-IT1調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的功能研究.pdf

1、乳腺癌是最常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，而腫瘤轉(zhuǎn)移又是乳腺癌致死最重要的原因，對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究是目前乳腺癌研究的重要方向。腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵第一步是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）是一種長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸是非編碼RNA。研究報(bào)道，LncRNA可通過(guò)多種方式，在轉(zhuǎn)錄水平或轉(zhuǎn)錄后水平參與調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。SPRY4-IT1是 LncRNA中的一種，其在多種腫瘤包括乳腺癌中扮演重要角色，參與調(diào)控腫瘤的侵襲、增殖、轉(zhuǎn)移。最

2、早的文獻(xiàn)報(bào)道，過(guò)表達(dá) SPRY4-IT1在黑色素瘤中具有促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。在乳腺癌中，有文獻(xiàn)報(bào)道，SPRY4-IT1與乳腺癌細(xì)胞的增殖相關(guān)，過(guò)表達(dá)SPRY4-IT1能夠通過(guò)調(diào)控鋅指蛋白703從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖。但是，在乳腺癌中SPRY4-IT1與EMT兩者之間是否存在調(diào)控關(guān)系，對(duì)EMT的具體影響如何，尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　本研究通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR的方法分析乳腺癌Luminnal型細(xì)胞株MCF7，T47D，Her2型細(xì)胞

3、株SKBR3和三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、BT549、BT474中SPRY4-IT1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在mRNA水平，ERα陽(yáng)性Luminnal型細(xì)胞株MCF7，T47D中SPRY4-IT1表達(dá)水平較低，而ER陰性的乳腺癌細(xì)胞系SKBR3、BT549、MDA-MB-231、BT474中SPRY4-IT1表達(dá)水平相應(yīng)較高。通過(guò)在內(nèi)源性表達(dá)比較低的MCF7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)SPRY4-IT1，通過(guò)劃痕、浸潤(rùn)、遷移實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示外源性過(guò)表達(dá)

4、SPRY4-IT1能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移潛能。并且，我們通過(guò)平板克隆實(shí)驗(yàn)和CCK8細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，外源性過(guò)表達(dá)SPRY4-IT1也能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力和增殖能力。與此同時(shí)，我們通過(guò)在內(nèi)源性表達(dá)比較高的細(xì)胞MDA-MB-231中敲減SPRY4-IT1，下調(diào)SPRY4-IT1的表達(dá)，然后通過(guò)劃痕、浸潤(rùn)、遷移實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示下調(diào)SPRY4-IT1的表達(dá)能夠抑制細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移潛能。并且，我們通過(guò)平板克隆實(shí)驗(yàn)和CCK8細(xì)胞增殖實(shí)

5、驗(yàn)證明證明，敲減SPRY4-IT1能夠抑制乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力和增殖能力。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)并且證明SPRY4-IT1與乳腺癌的遷移、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移潛能相關(guān)。而EMT的過(guò)程在腫瘤遷移、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，因此我們分析SPRY4-IT1是否介導(dǎo)調(diào)控乳腺癌EMT過(guò)程。我們?cè)趦?nèi)源性表達(dá)比較低的MCF7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)SPRY4-IT1，通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SPRY4-IT1的上調(diào)能夠使腔上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cadherin表達(dá)降低。同樣的，我們通過(guò)在內(nèi)源