固體發(fā)酵黑曲霉產(chǎn)單寧酶的研究.pdf

1、單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase，EC3.1.1.20)，它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。單寧酶用途廣泛，主要來源于微生物，目前研究得較多較為深入的是青霉和黑曲霉。本論文利用紫外誘變的方法選育到一株產(chǎn)單寧酶的黑曲霉菌株，對該菌株固體發(fā)酵產(chǎn)單寧酶的發(fā)酵工藝條件及發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化，研究確立了固體發(fā)酵所產(chǎn)單寧酶的酶活檢測方法，論文還對產(chǎn)單寧酶的黑曲霉菌株發(fā)酵產(chǎn)單寧酶的固定化進行了研究。 本

2、研究采用紫外誘變的菌種選育手段進行黑曲霉菌株的誘變，用在平板培養(yǎng)基中加入微量的的溴酚藍(0.004％)，利用黑曲霉生長形成的變色圈大小對菌株進行篩選，成功的選育到了一株產(chǎn)單寧酶達92U／mL的黑曲霉高產(chǎn)菌株。它的單寧酶活性較原始出發(fā)菌株提高了1倍多。 論文首先研究和建立了適合固體發(fā)酵所產(chǎn)胞外單寧酶活性的檢測方法。此方法是根據(jù)沒食子酸(單寧酶催化沒食子酸丙酯水解產(chǎn)生)與甲醇繞丹寧之間形成色團物質(zhì)的方法來測定單寧酶的活性，沒食子酸丙

3、酯做底物顯色明顯，選擇520nm波長下檢測，成功的避開了干擾物質(zhì)的吸收峰波長，減小了誤差，該方法對底物純度要求低，常規(guī)實驗室的儀器就能進行檢測，具有簡便直觀、靈敏準確、重復性好的特點。 對選育的產(chǎn)單寧酶黑曲霉菌株進行固體發(fā)酵產(chǎn)單寧酶研究，結(jié)果表明產(chǎn)單寧酶的最適氮源為NH4NO3，對發(fā)酵培養(yǎng)基進行單因素優(yōu)化結(jié)果表明：每5g培養(yǎng)基基質(zhì)含1％NH4NO3；0.1％NaCl；0.1％MgSO4；8％五倍子；90％麩皮。對發(fā)酵條件的單因素

4、優(yōu)化后得到：初始水分含量50％，初始ph6.0，溫度30℃為最佳產(chǎn)酶條件. 利用響應(yīng)面方法對顯著影響產(chǎn)單寧酶的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件因素進行優(yōu)化，得到固體發(fā)酵黑曲霉誘變株最佳產(chǎn)單寧酶酶條件為：五倍子含量為9.5％；氮源NH4NO3添加量為2.3％；溫度為32℃。在此最佳發(fā)酵條件下發(fā)酵產(chǎn)單寧酶達219.4U／ml。 對發(fā)酵產(chǎn)單寧酶進行固定化研究，以海藻酸鈉為固定化單寧酶的載體，采用交聯(lián)-包埋-交聯(lián)的方法對單寧酶進行固定化。對前交