我院銅綠假單胞菌的耐藥性和耐藥基因的檢測(cè)與分析.pdf

1、目的:分析天津市北辰區(qū)中醫(yī)院PA（Pseudomonas aeruginosa，銅綠假單胞菌）的檢出情況和耐藥性，為指導(dǎo)臨床控制銅綠假單胞菌感染、合理使用抗菌藥及延緩細(xì)菌耐藥產(chǎn)生提供參考；另外，為了了解本院銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制，指導(dǎo)臨床合理用藥，本論文從β-內(nèi)酰胺酶編碼基因種類(lèi)、存在狀況和外膜蛋白OprD2基因缺失狀況方面分別進(jìn)行了初步研究。
　　方法:1.采集我院住院患者送檢標(biāo)本分離的銅綠假單胞菌共58株，鑒定菌株的室驗(yàn)采用A

2、TB Expression細(xì)菌鑒定系統(tǒng)，來(lái)源于法國(guó)梅里埃公司；藥敏試驗(yàn)采用ATB Expression細(xì)菌藥敏板條，以及瓊脂紙片擴(kuò)散（K-B）法進(jìn)行細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)。
　　2用PCR(polymerase chain reaction，聚合酶鏈反應(yīng))法檢測(cè)17種銅綠假單胞菌相關(guān)耐藥基因。
　　3對(duì)銅綠假單胞菌其中幾種耐藥基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與GenBank登錄的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。
　　結(jié)果：1.通過(guò)

3、對(duì)18種抗生素做藥敏試驗(yàn)，58株銅綠假單胞菌耐藥率高的有氨芐西林+舒巴坦100％、頭孢克洛95.4%、頭孢丙烯95.4%、頭孢克肟94.4%、頭孢美唑94.3%，耐藥率較高的是替卡西林/克拉維酸64.6%，其余抗生素磷霉素、依替米星、阿洛西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢曲松、慶大霉素、諾氟沙星、左氧氟沙星、氨曲南、頭孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星的耐藥率為36.6%、32.1%、31.1%、26%、22.9%、17.4%、16.5%、15.5%

4、、15.5%、12.8%、7.33%，其中亞胺培南的耐藥率為10%。
　　2.58株銅綠假單胞菌中β-內(nèi)酰胺酶編碼基因及檢出率：TEM（15.5%)、TEM-1(10.3%)、VEB(1.7%)、SHV(6.8%)、GES(3.4%)、PER(3.4%)、OXA-1(32.7%)、OXA-2（15.5%）、OXA-10（13.7%）、CTX-M-1（24.1%）；金屬β-內(nèi)酰胺酶基因及檢出率為：ⅥM（25.9%）、IMP（19%）

5、、SPM（6.8%）、GIM（0%）、SIM（0%）；質(zhì)粒AmpC酶基因DHA的檢出率是10.3％；膜孔蛋白OprD2基因的缺失率為48.3％。
　　3.VEB、SHV、TEM和DHA4個(gè)基因的核苷酸序列與 Genebank中參比基因序列同源性均為100％，未發(fā)現(xiàn)基因變異現(xiàn)象。
　　結(jié)論：1.本院銅綠假單胞菌對(duì)氨芐西林+舒巴坦的耐藥率最高為100%，對(duì)于氨芐西林銅綠假單胞菌是天然耐藥，即使加了舒巴坦酶抑制劑，我院統(tǒng)計(jì)耐藥率仍

6、然是百分之百；其次是頭孢克洛為95.4%、頭孢丙烯為95.4%，頭孢克肟為94.4%，頭孢美唑也達(dá)到了94.3%，對(duì)于這些耐藥率超過(guò)75%的抗菌藥物，應(yīng)暫停該類(lèi)抗菌藥物的臨床應(yīng)用，根據(jù)追蹤細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果，再?zèng)Q定是否恢復(fù)其臨床應(yīng)用。耐藥率超過(guò)50%的抗菌藥物為替卡西林/克拉維酸64.6%，應(yīng)參照藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用抗生素；耐藥率超過(guò)40%的抗菌藥物，應(yīng)慎重經(jīng)驗(yàn)用藥；耐藥率超過(guò)30%的抗菌藥物有磷霉素36.6%、依替米星32.1%、阿洛西林3

7、1.1%，應(yīng)及時(shí)將預(yù)警信息通報(bào)本院醫(yī)護(hù)人員；低于30%的抗菌藥物有哌拉西林/他唑巴坦26.0%、頭孢曲松22.9%、慶大霉素17.4%、諾氟沙星16.5%、氨曲南15.5%、頭孢哌酮/舒巴坦12.8%、亞胺培南10.0%，可能會(huì)更合理地成為治療混合感染的二線藥；氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物諾氟沙星耐藥率16.5%和左氧氟沙星耐藥率15.5%，雖然耐藥率較低，但此類(lèi)藥物，如果長(zhǎng)期使用也可能發(fā)生耐藥，所以測(cè)試重復(fù)分離菌株可能是必要的；單環(huán)類(lèi)抗生素的代

8、表氨曲南（15.5%）有抗PA活性，但較弱，而且臨床反應(yīng)效果不好，療效有限，僅適用于輕、中度感染；阿米卡星的耐藥率最低為7.33%,一般不單獨(dú)用于治療，但可以用于聯(lián)合治療。
　　2.β-內(nèi)酰胺酶編碼基因的檢出率比較高(79％)，陽(yáng)性率比較高的基因是:OXA-1(32.7％)、VIM(25.9％)、CTX-M-1(24.1％)；膜孔蛋白OprD2基因的缺失率比較高達(dá)48.3％，說(shuō)明或許是很多種耐藥的基因共同作用產(chǎn)生了PA對(duì)β-內(nèi)酰胺