利用RNA干擾技術(shù)抑制四九菜心中黑芥子酶基因的表達(dá).pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文利用RNA干擾技術(shù)抑制四九菜心中黑芥子酶基因的表達(dá)姓名：王定鋒申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：尤民生;楊廣20080301D o w n - R e g u l a t i o n o f M y r o s i n a s e G e n e E x p r e s s i o n i nB r a s s i c a p a r a c h i n e n s i sB a i l e

2、y b y R N A I n t e r f e r e n c eI np l a n t s o f t h e c r u c i f e r o u sf a m i l y ，w h i c hi n c l u d e st h em o d e l p l a n tA r a b i d o p s i st h a l i a n aa n db r a s s i c ac r o p s ，t h em y r

3、o s i n a s e - g l u c o s i n o l a t es y s t e ms e r v e s a sam a j o rc h e m i c a ld e f e n s e m e c h a n i s m a g a i n s tp h y t o p h a g o u s i n s e c t sa n d p a t h o g e n s ，a n di sa l s oc a l

4、l e d “m u s t a r do i lb o m b ”．T h e p o t e n t i a lr e s o u r c e s o f i n s e c t - r e s i s t a n tg e r m p l a s m a r er e l a t i v e l yl i m i t e di nB r a s s i c a p a r a c h i n e n s i sB a i l e

5、y , i ti s t h e r e f o r ev e r yi m p o r t a n tt os e n s i b l y u s et h e m y r o s i n a s e - g l u c o s i n o l a t e s y s t e m f o r b r e e d i n g o fi n s e c t - r e s i s t a n tv a r i e t i e s ．T h

6、 ed e f e n s e m e c h a n i s ms h o u l d b es u f f i c i e n t l yu n d e r s t o o db e f o r e t h es y s t e mC a n b ew e l l a p p l i e di n p r a c t i c e ．O n e f r a g m e n to f m y r o s i n a s e g e n

7、eo f8 9 0b pW a sc l o n e df r o mt h et o t a lR N A o fB r a s s i c a p a r a c h i n e n s i s B a i l e yu s i n g R T - P C R m e t h o d ，a n d i n s e r t e di n t ot h e t w o s i d e so f t h ei n t r o ni np

8、J M 0 0 7v e c t o ri na r e v e r s e w a y t op r o d u c et h eM Y ( R N A i ) c a s s e t t e ．T h i sc a s s e t t eW a se x c i s e df r o mp J M 0 0 7 b yP s 譙e n d o n u c l e a s ea n di n s e r t e di n t ot h

9、eb i n a r yv e c t o rp C A M B I A l 3 0 1t o p r o d u c eM r ( R N A i ) V e c t o r ，w h i c h w a s t r a n s f e r r e di n t oA g r o b a c t e r i u mt u m e f a c i e n sG V 3 1 0 1 a n dt h e nt r a n s f o r

10、m a t i o nW a sc o n d u c t e d ．U n d e r t h e s e l e c t i o n o fh y g r o m y c i n ，t r a n s g e n i c p l a n t l e t s w e r e o b t a i n e d ．F o u rt r a n s g e n i c l i n e sw e r ei d e n t i f i e db

11、yP C R a n dS o u t h e r nb l o t ，a n dm y r o s i n a s e g e n e sw e r e e f f e c t i v e l ys u p p r e s s e di nt h et r a n s g e n i c p l a n t s t e s t e db y N o r t h e m b l o t ．I nt h em e a n t i m e

12、，w es t u d i e dt h ee f f e c to f12d i f f e r e n tc o m b i n a t i o n so f 6 - B A a n dN A A o n p l a n tr e g e n e r a t i o n o f B r a s s i c a p a r a c h i n e n s i s B a i l e yi ni n d u c i n gm e d i

13、 a ．A n dd e t e r m i n e d t h e s u i t a b l e h y g r o m y c i n s e l e c t i o n c o n c e n t r a t i o n f o r B r a s s i c ap a r a c h i n e n s i s B a i l e y t r a n s f o r m a t i o n ．F i n a l l y ，as

14、 u i t a b l eg e n e t i c t r a n s f o r m a t i o ns y s t e mo f B r a s s i c a p a r a c h i n e n s i s B a i l e yW a s d e v e l o p e d ．K e y w o r d s ：m y r o s i n a s e ；B r a s s i c a p a r a c h i n e