新型產(chǎn)胞外多糖細(xì)菌的篩選及其多糖結(jié)構(gòu)的探究.pdf

1、微生物胞外多糖因?yàn)榫哂邪踩愿?、生產(chǎn)周期短和經(jīng)濟(jì)效益好的優(yōu)點(diǎn)越來越引起人們的關(guān)注，各種胞外多糖產(chǎn)品被應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、工業(yè)、環(huán)保等多個(gè)領(lǐng)域。篩選出新型產(chǎn)胞外多糖細(xì)菌和發(fā)現(xiàn)新型胞外多糖是開發(fā)其應(yīng)用的基礎(chǔ)與前提。本論文以篩選出可以分泌出具有應(yīng)用潛力的胞外多糖的新細(xì)菌為出發(fā)點(diǎn)，同時(shí)也期望能夠通過優(yōu)化培養(yǎng)條件增加其多糖產(chǎn)量。
　　本論文采用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行初篩，搖瓶液體培養(yǎng)方法進(jìn)行復(fù)篩，共篩選出了5株胞外多糖產(chǎn)生菌。其中從江西省上饒市玉山

2、縣三清山山腳闊葉林土壤樣品中獲得菌株在相同發(fā)酵時(shí)間內(nèi)胞外多糖產(chǎn)量最大，結(jié)合鏡檢、革蘭氏染色、不同pH生長情況與耐鹽性范圍等生理、生化試驗(yàn)和比對(duì)其16SrDNA序列確定該菌株為類芽孢桿菌屬新種，命名為Paenibacillussp.44051，構(gòu)建了該菌16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　用搖瓶培養(yǎng)Paenibacillussp.44051菌進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)糖，通過單因素試驗(yàn)確定了該菌株產(chǎn)胞外多糖最佳的碳源為可溶性淀粉(4％)、最佳氮源為KN

3、O3(0.2％)。最佳的發(fā)酵培養(yǎng)條件為:初始pH7.0、溫度30℃、裝液量50mL/250mL、接種量10％。3-36h為該菌的對(duì)數(shù)生長期，穩(wěn)定生長期出現(xiàn)在36-78h，78h后細(xì)菌進(jìn)入衰亡期，同時(shí)發(fā)酵液粘度下降。該菌株利用可溶性淀粉的最終產(chǎn)物為酸性物質(zhì)，致使發(fā)酵液pH在96h內(nèi)從7.0緩慢下降至5.8。搖瓶發(fā)酵78h后其多糖產(chǎn)率可達(dá)1.46％。
　　測定胞外多糖的化學(xué)組成，發(fā)現(xiàn)其總糖含量高達(dá)74.05％、其他成分為:水分4.21

4、％、灰分10.67％、蛋白與核酸等雜質(zhì)11.07％;該多糖在熱水中溶解度為0.683g/100gH2O;胞外多糖粘度隨著溫度的升高而降低，80℃時(shí)粘度僅為34mPas。將粗多糖進(jìn)行純化，采用鹽酸法脫除蛋白、透析除鹽及冷凍干燥。用完全酸水解法水解純化后的多糖，通過薄層色譜分析得出該多糖分子由一種單糖組成，很可能為甘露糖。采用傅里葉變換紅外光譜分析多糖的特殊吸收峰，確定該多糖構(gòu)型為α-吡喃糖苷鍵型。
　　綜上所述，Paenibacil