迷走神經(jīng)和DVC在膽堿能抗炎通路中的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、膽堿能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP)是指當(dāng)致病細(xì)菌入侵時，體內(nèi)的迷走神經(jīng)及其遞質(zhì)乙酰膽堿(Acetylcholine，Ach)與免疫系統(tǒng)相互作用參與抗炎。已有的研究表明，迷走傳出神經(jīng)及其遞質(zhì)Ach參與了膽堿能抗炎通路的調(diào)控過程。黃健等通過先夾傷迷走神經(jīng)干中樞端，注射內(nèi)毒素后，發(fā)現(xiàn)迷走神經(jīng)傳出纖維放電頻率增加。Borovikova等直接電刺激內(nèi)毒素血癥大鼠的迷走神經(jīng)傳出纖維，

2、可抑制肝臟和心臟腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的生成，降低血清TNF-α的含量。Thomas等研究顯示，電刺激迷走神經(jīng)能夠抑制缺血再灌注損傷所導(dǎo)致的全血TNF-α升高，緩解缺血再灌注引起的休克。石德光、胡森等切斷迷走神經(jīng)則使心肌的TNF-α水平顯著升高，炎性損傷加重；電刺激切斷的迷走神經(jīng)遠(yuǎn)端能使內(nèi)毒素(LPS)血癥大鼠肺組織中TNF-α含量顯著降低，炎性病理改變減輕。以上主要通過夾傷、電刺激或切斷迷走神經(jīng)的方法來研究迷走傳出神經(jīng)對炎癥反

3、應(yīng)的影響，但在迷走傳出神經(jīng)正常的情況下，其在炎癥反應(yīng)中放電頻率變化，無相關(guān)報道。
　　迷走傳出神經(jīng)及其遞質(zhì)Ach參與了抗炎反應(yīng)，表明炎癥反應(yīng)中迷走傳出神經(jīng)位于迷走神經(jīng)背核(DMV)內(nèi)的節(jié)前神經(jīng)元被激活，那么，炎癥信息是如何傳遞至DMV的?通常認(rèn)為周圍免疫信息可通過兩種途徑傳達(dá)到腦，一是血液中的細(xì)胞因子通過缺乏血腦屏障的最后區(qū)(AP)入腦，由AP直接傳遞至DMV，或由AP經(jīng)孤束核(NTS)間接傳遞至DMV。二為細(xì)胞因子通過迷走傳入神

4、經(jīng)將炎癥信息傳至NTS，由NTS傳到DMV。膽堿能抗炎通路中炎癥信號主要是通過缺乏血腦屏障的AP入腦還是通過迷走傳入神經(jīng)或兩者兼之，還不明確?！把铀鑳?nèi)臟帶”(MVZ)含有兒茶酚胺(CA)類等多種神經(jīng)活性物質(zhì)。一系列研究表明MVZ內(nèi)CA能神經(jīng)元參與了心血管和胃腸道功能的調(diào)節(jié)，如腦出血急性期延髓內(nèi)臟帶內(nèi)兒茶酚胺能神經(jīng)元有Fos蛋白表達(dá)；大鼠在束縛浸水應(yīng)激狀態(tài)下DVC內(nèi)Fos/TH表達(dá)增加。而內(nèi)毒素炎癥時，腦干NTS、DMV和AP內(nèi)的兒茶酚胺

5、能神經(jīng)元是否參加了炎癥信息的傳遞、分析和整合，有關(guān)該方面的研究至今尚未見報道。因此，本文擬采用辣椒素去神經(jīng)化的方法觀察內(nèi)毒素炎癥時對迷走神經(jīng)傳出纖維放電、血清TNF-α水平及DVC內(nèi)c-Fos+TH表達(dá)的影響，以探討迷走神經(jīng)和DVC在膽堿能抗炎通路中的作用及其機(jī)制。
　　本研究分為三部分:
　　第一部分，觀察內(nèi)毒素(LPS)炎癥時大鼠迷走神經(jīng)放電、血壓、血清 TNF-α水平以及DVC內(nèi)c-Fos表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)分兩組:LPS組

6、和對照(CON)組，LPS組靜脈注射LPS；CON組靜脈注射等容量的生理鹽水。結(jié)果與結(jié)論:在LPS組，與LPS注射前相比迷走神經(jīng)放電頻率顯著增加，血壓降低但不顯著；LPS組與CON組相比，神經(jīng)放電頻率和血清TNF-α水平顯著升高，腦干NTS、DMV和AP的c-Fos表達(dá)均顯著增強(qiáng)。提示迷走神經(jīng)、AP和NTS參與了炎癥反應(yīng)。
　　第二部分，辣椒素去神經(jīng)化后再給予 LPS刺激致炎，觀察大鼠迷走神經(jīng)傳出纖維放電、血壓、血清TNF-α水平

7、的變化以及腦干DVC內(nèi)c-fos表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)分為兩組:辣椒素+內(nèi)毒素(CAS+LPS)組和LPS組，CAS+LPS組先以辣椒素去神經(jīng)化后再靜脈注射LPS刺激致炎；LPS組直接靜脈注射等容量的LPS。結(jié)果與結(jié)論:在CAS+LPS組，與LPS注射前相比迷走神經(jīng)傳出纖維放電頻率顯著增加，血壓升高但不明顯；CAS+LPS組與LPS組相比，血清TNF-α濃度顯著升高，腦干NTS、DMV和AP內(nèi)c-fos表達(dá)均顯著減弱。提示內(nèi)毒素炎癥時，迷走傳出

8、神經(jīng)纖維興奮增多，參入了抗炎癥作用。外周炎癥信息主要通過迷走傳入神經(jīng)傳遞至NTS，由NTS傳到DMN，部分炎癥信號可通過AP傳至DMN。
　　第三部分，利用Fos蛋白與酪氨酸羥化酶(TH)免疫雙標(biāo)的方法，觀察LPS炎癥時對腦干NTS、DMV和AP內(nèi)CA能神經(jīng)元活動的影響。實(shí)驗(yàn)分為兩組:LPS組和CON組，LPS組靜脈注射LPS；CON組靜脈注射生理鹽水。結(jié)果與結(jié)論:LPS組與CON組相比，LPS炎癥時，NTS、DMV和AP內(nèi)TH陽