陜西七藥紅毛七中皂苷類活性成分的研究.pdf

1、紅毛七為小檗科紅毛七屬植物類葉牡丹Caulophyllum robustum Maxim的根和根莖，又名葳嚴仙、金絲七等，分布于我國的黑龍江、陜西、湖北等地，主要含有生物堿類、三萜皂苷類以及其他類化學成分。紅毛七是陜西七藥之一，具有活血散瘀、祛風止痛、降血壓、止血、解草烏中毒功效。民間主要用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)期少腹疼痛、產(chǎn)后瘀血疼痛、關(guān)節(jié)炎、扁桃腺炎、高血壓、勞傷。近年來對紅毛七化學成分進行分離鑒定和生物活性研究的報道甚多，發(fā)現(xiàn)其具有抑菌、

2、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗心肌缺血等作用，并且不斷有新的三萜皂苷和生物堿類成分被發(fā)現(xiàn)，這說明陜西產(chǎn)地的紅毛七與其他產(chǎn)地的紅毛七在化學成分上存在一定的差異，在預實驗中我們發(fā)現(xiàn)紅毛七中可能還有新的化合物沒有被發(fā)現(xiàn)，為了進一步明確紅毛七的有效成分和生物活性，本課題組對采自陜西太白山的紅毛七中的皂苷類成分進行了系統(tǒng)的分離和結(jié)構(gòu)鑒定，并進行了抗腫瘤活性初步篩選，為其開發(fā)與利用提供更好的理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。
　　本文運用Sephadex LH-20柱色

3、譜、硅膠柱色譜、反相 ODS柱色譜及制備型HPLC等方法對其70％乙醇提取物進行分離，得到25個單體化合物，并通過化合物理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)分析等手段鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，除化合物22為羽扇豆烷型三萜皂苷外，其余24個均為齊墩果烷型三萜皂苷類化合物。這些化合物分別為：HN-saponin F(1)，葳嚴仙皂苷 C(2)，3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-葳嚴仙皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)，kalopanax saponin G(4

4、)，刺囊酸皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)，葳嚴仙皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)，3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)，3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-絲石竹皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D

5、-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-刺囊酸皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)，類葉牡丹苷 C(10)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元

6、-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(12)，齊墩果酸皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(13)，16α-O-甲基-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(14)，類葉牡丹苷 A(15)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖-常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃木糖(1→6)]-β-D-

7、吡喃葡萄糖苷(16)，3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-葳嚴仙皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(17)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-絲石竹皂苷元-28-O-α-L

8、-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)，紅毛七皂苷 D(20)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(21)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-樺木酸皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(22)，3-

9、O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)[β-D-吡喃葡萄糖(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸皂苷元-28-O-β-D-吡喃半乳糖糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(23)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-刺囊酸皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(24)，3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O

10、-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(25)。其中，皂苷6,9,14,19和22為5個新化合物，皂苷8,12,16和23為首次從該屬植物中分離得到，皂苷3,5,11和21為首次從該植物中分離得到。
　　初步體外藥理活性篩選顯示：化合物2和13對HL-60, Hep-G2和U-251MG細胞均具有較強的細胞毒性，其中化合物2對HL-60, Hep-G2和U-251MG細胞有顯著活性，

11、IC50分別是2.56,4.76和5.81μM；化合物13對HL-60, Hep-G2和U-251MG細胞具有顯著活性，IC50分別是1.58,3.58和4.40μM。化合物5和6對HL-60細胞有比較弱的活性，化合物19對U-251MG細胞顯示弱活性。從實驗結(jié)果可以看出，紅毛七皂苷成分的生物活性具有結(jié)構(gòu)特異性?；衔?,6,9,14,18和22活性很弱或無活性，我們推斷其原因可能是由于化合物5和6的苷元-3位無氧苷鍵且苷元-28位成酯

12、苷鍵的單糖鏈皂苷；化合物9,14,18和22為苷元-3位有氧苷鍵且苷元-28位成酯苷鍵的雙糖鏈皂苷?；衔?9也顯示弱的活性,推測可能是苷元-23位為醛基的原因。因此我們推斷，苷元-3成氧苷和苷元-28位為游離的羧基是具有生物活性的必須條件，齊墩果酸型三萜皂苷細胞毒性強于常春藤型皂苷，這與文獻報道相符。
　　課題創(chuàng)新性及研究意義：
　　1.對陜西太白山產(chǎn)紅毛七的皂苷類化學成分進行了系統(tǒng)研究，分離鑒定了25個化合物，均為五環(huán)三

13、萜皂苷類成分，初步摸清了其主要的皂苷類成分。
　　2.發(fā)現(xiàn)5個新化合物，新化合物14的苷元為葳嚴仙皂苷元的16甲基化衍生物，這一結(jié)構(gòu)特征在本屬植物皂苷中首次被發(fā)現(xiàn)，經(jīng)系統(tǒng)文獻檢索，確定其為一種新的皂苷元結(jié)構(gòu)類型。其中新化合物19和已知化合物8的苷元 gypsogenin(絲石竹皂苷元)和新化合物22的苷元 betulinic acid(樺木酸)為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，且化合物22是首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)的羽扇豆烷型三萜皂苷，另有8種

14、皂苷首次從該植物中分離得到，其中4種首次從該屬植物中獲得，這提示不同產(chǎn)地的植物可能存在成分的差異。
　　3.通過體外抗腫瘤活性篩選，有2個對多種腫瘤細胞具有顯著活性的三萜皂苷，初步探討了齊墩果烷型三萜皂苷抗腫瘤的構(gòu)效關(guān)系。
　　4.以上研究和發(fā)現(xiàn)為紅毛七化學成分的研究積累了新的資料，為合理利用陜西七藥藥用資源提供了科學依據(jù)，為進一步研究其活性物質(zhì)積累了實驗材料，為紅毛七屬植物的進一步研究提供了新的資料，同時也為新藥開的發(fā)提供