大鼠腦挫傷后腦組織NF-κB表達(dá)與損傷時(shí)間關(guān)系.pdf

1、目的：應(yīng)用免疫組化(SABC法)、免疫印跡(Western blot)法及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測大鼠腦挫傷后腦組織中NF-κB的表達(dá)規(guī)律，探討NF-κB表達(dá)與腦損傷經(jīng)過時(shí)間的關(guān)系，以期為法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中早期推斷腦損傷時(shí)間提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：選取64只健康成年SD大鼠，雌雄不限，體重250±10g(由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=56)及對照組(n=8)，實(shí)驗(yàn)組依據(jù)損傷時(shí)間不同再分為7個(gè)亞

2、組。對大鼠實(shí)施麻醉后，實(shí)驗(yàn)組采用自由落體打擊法于顱骨中線旁3mm處造成腦挫傷模型，于損傷后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七個(gè)時(shí)間點(diǎn)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只)取挫傷處腦組織用常規(guī)蘇木素-伊紅染色技術(shù)(hematoxylin and eosin,HE)對大鼠腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、NF-κB的分布特征進(jìn)行光鏡觀察，同時(shí)另取100mg，置于-80℃液氮中保存?zhèn)溆?；對照組大鼠僅鉆孔處理，但不受打擊，其余處理與實(shí)驗(yàn)組相

3、同。應(yīng)用免疫組化(SABC)法、免疫印跡(Western blot)法及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)結(jié)合圖像分析技術(shù)半定量檢測大鼠腦組織NF-κB含量的變化，并與對照組作比較。將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：(1)紫外-可見光分光光度計(jì)檢測RNA度、濃度及完整性較好，可以滿足下一步實(shí)驗(yàn)的要求；(2)NF-κB分別與內(nèi)參基因rpL32擴(kuò)增效率一致，說明內(nèi)參基因選擇正確，引物設(shè)計(jì)特異性強(qiáng)、反應(yīng)性能良好；(3)免疫組化(SAB

4、C)法、大鼠腦挫傷后在腦組織中于傷后1h即有少量NF-κB陽性細(xì)胞，48h陽性細(xì)胞明顯增加并達(dá)到峰值，72h隨后逐漸減少,7d后偶見陽性細(xì)胞，14d后未見陽性細(xì)胞。(4)免疫印跡(Western blot)法，大鼠腦挫傷后在腦組織中于傷后1h NF-κB蛋白增加，12-48達(dá)高峰，72h后下降，14d基本恢復(fù)到正常水平(5)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法，大鼠腦挫傷后在腦組織中于傷后1 h NF-κBmRNA表達(dá)即快速增加，4h后逐漸下降，