果蠅Dnop5和Dxl6基因功能的初步研究.pdf

1、mRNA前體的選擇性剪接發(fā)生頻率很高，它在人類基因組中廣泛存在，是增加蛋白質(zhì)多樣性及基因表達復(fù)雜程度的主要原因。近來研究顯示，一類富含絲氨酸和精氨酸的蛋白(SR蛋白)對于剪接的順利完成有著至關(guān)重要的作用。SR蛋白是具有幫助識別正確剪接位點并促進剪接體的成熟的一類重要剪接因子，為組成性剪接所必需，在選擇性剪接中更具有不可替代的作用。 Dxl6 基因是2000年克隆的一種編碼新基因。根據(jù)其氨基酸序列特點分析，它可能為SR蛋白家族的成

2、員，參與剪接過程。原位雜交顯示，Dxl6基因主要在果蠅胚胎后期的神經(jīng)系統(tǒng)中表達，與神經(jīng)發(fā)育相關(guān)。Dxl6基因由兩個外顯子和一個內(nèi)含子組成，其內(nèi)含子編碼另一蛋白DNop5。DNop5是Nop5/Sik1家族中的一員，這一家族成員主要參與小核糖體蛋白復(fù)合物的組成。原位雜交顯示：DNop5 在果蠅胚胎期表達集中在中胚層，亞細胞定位于細胞核。為了研究Dxl6和Dnop5基因的功能我們購買了兩株P(guān)因子插入的果蠅：K00230和K00213，P因子

3、均插在Dxl6和Dnop5之間，但K00230中P因子靠近Dnop5基因，而K00213的P因子靠近Dxl6基因。這兩株突變的果蠅表型非常相似，均在三齡幼蟲或蛹期致死，少數(shù)逃逸者也有背部剛毛、翅膀、腿、眼睛發(fā)育的異常。Northern和Western blot結(jié)果顯示：這兩株突變的果蠅中Dxl6和Dnop5基因的表達均有所下降。 在本論文中，首先，制備了特異性的抗 DNop5多克隆抗體并用該抗體檢測了果蠅體內(nèi)DNop5 的表達情

4、況，為后續(xù)的實驗提供了較好的工具。 其次，構(gòu)建了 DXl6 和 DNop5 過表達的轉(zhuǎn)基因果蠅以及 DXl6 和 DNop5 的 RNAi 轉(zhuǎn)基因果蠅，通過UAS/GAL4系統(tǒng)在特定的組織過表達或抑制 DXl6 和 DNop5 來觀察果蠅的表型。結(jié)果表明，在果蠅全身過表達DNop5時，沒有引起明顯的表型缺陷；但DNop5在果蠅體內(nèi)表達水平的降低可以導(dǎo)致在蛹期之前死亡或剛毛的異常，DXl6 的過表達也出現(xiàn)果蠅致死的現(xiàn)象。