桿狀病毒AcMNPV orf109基因功能研究.pdf

1、桿狀病毒是一類寄生于節(jié)肢動物的具有包膜包被的閉合雙鏈DNA病毒，其病毒粒子呈桿狀，宿主主要為鱗翅目昆蟲幼蟲。桿狀病毒被廣泛的應(yīng)用為病毒殺蟲劑和外源基因高效表達(dá)載體。桿狀病毒科分為四個屬：Alpha桿狀病毒屬、Beta桿狀病毒屬、Gamma桿狀病毒屬和Delta桿狀病毒屬。苜蓿丫紋夜蛾核多角體病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)在分類學(xué)上屬于桿狀病毒

2、科Alpha桿狀病毒屬的GroupⅠ，并且是Alpha桿狀病毒屬的代表種，了解其中基因的功能對于其它桿狀病毒基因功能的研究具有重要的指導(dǎo)意義。
　　 在AcMNPV中預(yù)測的152個開放性閱讀框(Open Reading Frames，ORFs)中，orf109是桿狀病毒科中30個保守基因之一但其功能未知，其很可能為病毒復(fù)制的必需基因。對ac109基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，其基因序列全長1173bp，有且僅有一個晚期或極晚期基因

3、啟動子保守元件GTAAG，預(yù)測其編碼一個含有390個氨基酸、分子量為44.802KDa的蛋白質(zhì)。通過預(yù)測蛋白保守結(jié)構(gòu)域的InterProScan分析表明，ac109基因序列中存在一個屬于未知功能病毒蛋白質(zhì)家族DUF673的結(jié)構(gòu)域。
　　 此研究通過ET recombination系統(tǒng)構(gòu)建了ac109基因缺失型AcMNPV重組病毒，并且通過Bac-to-Bac系統(tǒng)構(gòu)建了帶有綠色熒光蛋白基因(gfp)和多角體基因(polyhedri

4、n)雙標(biāo)記的野生型(Ac-GP)、ac109基因缺失型(Ac-ac109-KO-GP)及ac109基因補回型(Ac-ac109-REP-GP)重組病毒。
　　 研究中將三種重組病毒分別轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞并觀察ac109的缺失對病毒在離體細(xì)胞中復(fù)制的影響。熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明缺失型重組病毒的擴散被限制于初次轉(zhuǎn)染細(xì)胞，呈現(xiàn)出單細(xì)胞感染的現(xiàn)象。光鏡顯微鏡未能在缺失型重組病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中觀察到多角體。病毒轉(zhuǎn)染上清滴度測試結(jié)果表明在缺失型重