天藍色鏈霉菌膜蛋白復(fù)合物及部分脂蛋白功能的研究.pdf

1、細胞膜是原核生物細胞的重要組成結(jié)構(gòu)，其功能主要涉及能量轉(zhuǎn)換、物質(zhì)運輸以及信息識別與傳遞等。了解細胞膜的功能與機制，特別是物質(zhì)的跨膜運輸，具有重要的實踐意義。
　　我們分別采用BNE、hrCNE等一維電泳、以及native/native、native/SDS-PAGE等二維電泳方法對天藍色鏈霉菌的膜蛋白質(zhì)組進行了分析研究。核酸干擾是影響 native電泳的主要因素，為了除去膜組分中核酸成分，在加入DDM抽提膜蛋白之后，我們采用了多種

2、方法去除核酸，結(jié)果表明，超速離心是一種有效地去除核酸方法，native電泳性能有了明顯提高。我們對BNE、hrCNE-DDM和hrCNE-Triton等三種電泳的最佳上樣量進行了比較研究；結(jié)果表明，三種電泳的最適上樣量均為80-100μg。
　　通過二級質(zhì)譜分析，我們鑒定了77個蛋白質(zhì)；其中，61個蛋白質(zhì)來自hrCNE-Triton/SDS-PAGE二維凝膠，48個蛋白質(zhì)來自hrCNE-DDM/SDS-PAGE二維凝膠，其余來自h

3、rCNE/hrCNE二維凝膠。根據(jù)這些蛋白質(zhì)的生理功能以及聚合狀態(tài)，我們對這些蛋白質(zhì)進行了分類，其中，20個蛋白質(zhì)分別歸屬于15個蛋白復(fù)合物，包括完整的ATP合酶，細胞色素aa3氧化酶核心酶，Tri1六聚體，GlnA同聚體以及BFR同聚體等。另外，我們鑒定了多個與跨膜運輸相關(guān)的蛋白，包括BldKB（SCO5113）、OBP（SCO5477）以及ABP（SCO2008）等；BldKB和OBP與寡肽的運輸有關(guān)，而ABP與氨基酸的運輸有關(guān)。O

4、BP和BldKB是膜組分中含量最豐富的兩個蛋白質(zhì)，它們是OppA家族的成員，而OppA家族在胞外多肽降解、信號傳導(dǎo)等方面具有重要作用。BldKB可能存在三種聚合狀態(tài)，分別是單體，二聚體以及四聚體；OBP也可能存在三種聚合狀態(tài)，分別是單體，二聚體以及四聚體；這種多聚體狀態(tài)很可能是它們轉(zhuǎn)運胞外復(fù)雜多肽的一種適應(yīng)方式。
　　天藍色鏈霉菌編碼223個脂蛋白，其中40％脂蛋白是溶質(zhì)結(jié)合蛋白，它們與碳水化合物、氨基酸、多肽、核苷以及鐵離子運輸

5、等密切相關(guān)，我們發(fā)現(xiàn)并鑒定17個溶質(zhì)結(jié)合蛋白。脂蛋白SCO4884和SCO4885具有PBP1_BmpA_PnrA_like保守區(qū)域，可能與核苷運輸有關(guān)。我們首先在大腸桿菌BL21中過量表達了脂蛋白SCO4884和SCO4885；根據(jù)hrCNE電泳、分子篩以及粒度測定結(jié)果，我們確認SCO4884和SCO4885在溶液中均以單體存在。利用等溫滴定量熱法，我們發(fā)現(xiàn) SCO4884、SCO4885與腺苷、脫氧腺苷、胞苷、脫氧胞苷以及尿苷等具有

6、親和特性，而與鳥苷、脫氧鳥苷以及胸苷等不具有親和特性。
　　放線紫紅素是一種II型聚酮化合物，其碳鏈合成由聚酮合酶核心酶（PKS）催化。已有研究表明，參與 II型聚酮化合物合成的各個酶之間存在相互作用，而且這些酶類可能分布在細胞的不同部位，比如，SCO5074存在于細胞壁，SCO5076、SCO5083以及SCO5084存在于細胞膜，而核心酶SCO5087和SCO5088可能也存在于細胞膜，組成ActKSαβ膜復(fù)合物。利用載體pS