海洋石油降解菌的分離鑒定及其在海洋石油污染生物修復(fù)中的應(yīng)用研究.pdf

1、由于全球性廣泛的石油生產(chǎn)、運輸、使用和處置，在許多環(huán)境特別是海洋環(huán)境中，石油污染已經(jīng)成為一個普遍而嚴重的問題。目前，我國沿海地區(qū)海水含油量已超過國家規(guī)定的海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)2～8倍。本文以原油或柴油為唯一碳源從廈門近海表層海水樣品中通過富集篩選得到了2組降解菌群。從柴油富集物中分離得到了2株細菌，經(jīng)16SrDNA鑒定分別屬于假單胞菌屬(Pseudomonaspseudoalcaligenes，97％)和食烷菌屬(Alcanivoraxdies

2、elolei，99％)。從原油富集物中分離得到了7株細菌，經(jīng)16SrDNA鑒定，分別屬于不動桿菌屬(Acinetobacterradioresistens，99％)、生絲單孢菌屬(Hyphomonasjohnsonii，99％)、食烷菌屬(Alcanivoraxborkumensis，99％)、根瘤菌屬(Mesorhizobiumloti，96％)、赤細菌屬(Erythrobacterflavus，93.58％)、玫瑰桿菌屬(Roseo

3、bactergallaeciensis，95.81％)和希瓦氏菌屬(Shewanellaaquimarina，99％)。其中，GY-2和Y-2與赤細菌屬和玫瑰桿菌屬已報到的其它種的16SrDNA同源性最高，但也僅為93.58％和95.81％。GY-2能產(chǎn)H2S；能利用萘、蒽、菲等多環(huán)芳烴作為生長的唯一碳源；對青霉素敏感；除含有赤細菌屬的主要脂肪酸C18:1ω7c外還含有脂肪酸C16:0；G+C含量為62.0～62.2％，實驗結(jié)果表明GY

4、-2是屬于赤細菌屬的一個新種，命名為芳烴赤細菌(Erythrobacteraromatiphilus)。Y-2能在37℃生長；有將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽的能力；除含有玫瑰桿菌屬共有的主要脂肪酸C18:1外，還含有C18:0和C16:0兩種主要脂肪酸；G+C含量為62.4％，實驗結(jié)果表明Y-2是屬于玫瑰桿菌屬的一個新種，命名為廈門玫瑰桿菌(Roseobacterxiamengensis)。 通過對分離得到的單菌的功能進行研究，選取了

5、實驗室保藏的6株柴油降解菌構(gòu)建了一個柴油降解菌群。通過柴油降解率的測定、殘油組分的GC-MS檢測分析和菌群結(jié)構(gòu)變化的PCR-DGGE檢測對該混合菌群進行了優(yōu)化，最終得到一組含有2HE-4、PN3-2和B-5三株細菌的柴油降解菌群，其對柴油的降解率為55.9％。此外，選取了AS-3、Y-1、AY-2、Y-2、GY-2、OY-1、AS-5、PN3-2、3C-9和B-5十株細菌，構(gòu)建了組合1(AS-3、Y-1、AY-2、Y-2、GY-2、OY

6、-1、AS-5)和組合2(AS-3、Y-1、AY-2、Y-2、PN3-2、3C-9、B-5)兩個原油降解菌群，將這兩個菌群與天然富集菌群的原油降解率進行比較，并檢測了天然富集菌群在降解不同底物時的菌群結(jié)構(gòu)變化，通過綜合分析優(yōu)化出一個含有OY-1、B-5和GY-2三株細菌的原油降解菌群。 將優(yōu)化得到的原油降解菌群應(yīng)用于戶外水池模擬石油污染的生物修復(fù)，記錄七天內(nèi)的表觀變化過程，發(fā)現(xiàn)在3天內(nèi)即表現(xiàn)出明顯的消除作用。利用GC-MS檢測七