參芍口服液對糖尿病大鼠心肌纖維化及炎性損傷的影響及機制的研究.pdf

1、目的:大量研究證實糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy, DCM)出現(xiàn)心肌損傷是多因素的，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(Renin-angiotensinaldosterone system，RAAS)及炎性因子的激活在其中發(fā)揮著重要作用。p38絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)與心肌纖維化密切相關，并可通過調(diào)節(jié)核轉錄因子-κ B(Nuclear tr

2、anscription factor-κB，NF-κB)的表達影響糖尿病心肌病的炎性損傷過程。目前研究表明血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)及其特異性1型受體——血管緊張素Ⅱ1型受體(Angiotensin type1 receptor, AT1R)介導RAAS，當AngⅡ激活心肌細胞膜上的AT1R后可上調(diào)p38MAPK的表達，加重心肌纖維化的進程;p38MAPK激活下游的NF-κB通路，調(diào)節(jié)相關炎性因子基因轉錄，加重心

3、肌炎性損傷。
　　為了真正意義上提高糖尿病心肌病患者的預后及生活質量，開發(fā)針對糖尿病心肌病的治療藥物顯得尤為重要，本研究中的參芍口服液（原名:寬心合劑）是在中醫(yī)治療多種炎性痛癥的芍藥甘草湯及治療胸痹的傳統(tǒng)方劑丹參湯的基礎上精制而成的中藥復方制劑，其對急性缺血-再灌注損傷后心肌纖維化有改善作用。本課題組前期研究表明，參芍口服液可以改善急性心肌炎所導致的心肌纖維化及炎性損傷。
　　基于上述發(fā)現(xiàn)，本課題的研究目的是，探討參芍口服液

4、是否通過調(diào)節(jié)AngⅡ/p38MAPK/NF-κB通路改善糖尿病心肌病大鼠心肌纖維化以及心肌炎性損傷。為傳統(tǒng)中醫(yī)理論找到相關分子生物學基礎，同時為早期診斷和緩解糖尿病心肌損傷提供可測指標。
　　方法:
　　1分組:將40只170-200g的清潔級(Specific pathogen free，SPF)Wistar雄性大鼠于SPF級動物實驗室喂養(yǎng)1周，將其隨機分為:①對照組;②模型組;③參芍低劑量組;④參芍中劑量組;⑤參芍高劑量

5、組，每組8只。對照組給予4周普通飼料，模型組、參芍低劑量組、參芍中劑量組、參芍高劑量組給予4周高脂飼料。
　　2造模:模型組、參芍低、中、高劑量組按25 mg/kg劑量腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)(濃度1％，pH4.5)。連續(xù)2次空腹血糖≥16.7 mmol/L，且有多飲、多尿、多食出現(xiàn)，則可確認2型糖尿病模型。對照組腹腔內(nèi)注射等體積檸檬酸鈉緩沖液。造模成功后，對照組給予12周普通飼料，模型組、參芍

6、低劑量組、參芍中劑量組、參芍高劑量組給予12周高脂飼料。
　　3給藥劑量及途徑:造模成功后參芍低、中、高劑量組分別給予參芍口服液125、250、500 mg/kg灌胃，對照組和模型組給予等體積蒸餾水灌胃，所有組別均灌胃12周。
　　4各組大鼠全部處死，取心臟左心室部分。HE染色觀察各組大鼠心肌組織病理變化;Masson染色計算心肌間質膠原容積分數(shù)(CVF);應用ELISA法計算心肌組織AngⅡ的含量，免疫組化方法觀察AngⅡ

7、、AT1R、TNF-α、NF-κB在糖尿病心肌病大鼠心臟中的蛋白表達;Western blot技術檢測大鼠心肌p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表達。
　　結果:
　　1藥效學研究結果
　　1.1模型組大鼠生理、病理變化:模型組大鼠均出現(xiàn)精神不振、飲水增多、尿量增多、活動減少、體毛不光澤、體重減少等現(xiàn)象。HE染色可以觀察到DCM大鼠心臟出現(xiàn)明顯的病理損傷。
　　1.2參芍口服液降糖效果及對心臟的保護作用:①

8、參芍低、中、高劑量組的體重較模型組增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);參芍低、中、高劑量組的心體比(Heart weight/Body weight，H/B)較模型組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);參芍低、中、高劑量組的左室質量指數(shù)(Left ventricularweight index，LVMI)較模型組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);②參芍低、中、高劑量組空腹血糖值較模型組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)

9、，參芍高劑量組空腹血糖值降低最顯著(P＜0.05);③可改善心肌的病理損傷:Masson染色可以觀察到參芍低、中、高劑量組心肌纖維化不同程度的改善。參芍低、中、高劑量組的CVF較模型組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，參芍高劑量組CVF降低最顯著(P＜0.05)。
　　2心臟保護機制研究結果
　　2.1模型組大鼠病變機制
　　研究發(fā)現(xiàn)，DCM大鼠表現(xiàn)為:①RAAS活性物質增強:心肌組織中AngⅡ的含量升高，與對照

10、組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;②心肌纖維化及炎性反應增強:心肌組織AngⅡ含量增加，心肌細胞表面AT1R表達增多，心肌p-p38MAPK蛋白量增多，NF-κB的蛋白表達增加，炎癥因子TNF-α含量也增加，以上指標模型組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.2參芍口服液對DCM大鼠心肌纖維化及炎性損傷的保護機制
　　參芍口服液可逆轉DCM大鼠心肌纖維化及炎性損傷，表現(xiàn)為:①抑制RAAS活性:參芍低、

11、中、高劑量組心肌組織AngⅡ含量降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義。②抑制心肌心肌纖維化及炎性反應:心肌組織AngⅡ含量減少，心肌細胞表面AT1R的蛋白表達減少，心肌p-p38MAPK的蛋白量減少，NF-κB的蛋白表達減少，其表達產(chǎn)物TNF-α釋放也減少，上述指標參芍低、中、高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1參芍口服液對DCM心肌纖維化及炎性損傷有改善作用，并在125、250、500