姜黃素對急性高脂血癥大鼠氧化應(yīng)激及腹主動脈Nrf2表達的影響.pdf

1、目的:隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，高脂血癥(Hyperglipemia，HLP)發(fā)病率逐年升高。高脂血癥能增加動脈壁細胞內(nèi)自由基釋放系統(tǒng)的活性，損傷動脈壁抗氧化機能，導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，引起內(nèi)皮形態(tài)及功能異常，終至動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）形成。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)是反應(yīng)氧化-抗氧化平衡的經(jīng)典指標。核因子E2相關(guān)

2、因子2(Nuclear factorE-2-related2，Nrf2)是抗氧化應(yīng)激的核心轉(zhuǎn)錄因子。早期預(yù)防和治療高脂血癥，可以延緩和減少動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，提高人群的生活質(zhì)量，降低致殘致死率。本實驗通過對急性高脂血癥大鼠預(yù)防性應(yīng)用姜黃素，觀察急性高脂狀態(tài)對內(nèi)皮形態(tài)和功能的影響以及氧化應(yīng)激指標的變化，探討姜黃素保護內(nèi)皮、調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激狀態(tài)的作用和機制。
　　方法:
　　1、大鼠分組及預(yù)防性用藥:
　　健康成年雄性S

3、prague-Dawley大鼠40只，按體重隨機分為正常對照組（NC組，n=8）、模型組（n=8只）、低劑量姜黃素組（125mg/kg.d姜黃素化合物組，LC組，n=8）、高劑量姜黃素組（250mg/kg.d姜黃素化合物組，HC組，n=8）、阿托伐他汀組（他汀組，n=8）。NC組、模型組給予2.5ml/kg玉米油灌胃，LC組、HC組、他汀組分別給予125mg/kg.d、250mg/kg.d姜黃素化合物及2.1 mg/kg.d阿托伐他汀(

4、均為2.5ml/kg)每日灌胃1次，連續(xù)10d。
　　2、制備急性高脂血癥大鼠模型:
　　第10d灌胃1h后，模型組、LC組、HC組、他汀組均給予75％蛋黃乳液25ml/kg腹腔注射制造急性高脂血癥模型，NC組給予生理鹽水25ml/kg腹腔注射。
　　3、一般情況觀察:
　　試驗期間每天觀察各組大鼠的活動情況、精神狀態(tài)，記錄體重變化。
　　4、制備標本及檢測指標:
　　腹腔注射蛋黃乳液或生理鹽水24h

5、后取血檢測總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、葡萄糖(GLU)、氧化低密度脂蛋白膽固醇(oxLDL)、SOD活力、一氧化氮(NO)。然后麻醉大鼠取腹主動脈，部分采用戊二醛低溫速凍切片，用于HE染色觀察形態(tài)學變化，免疫組化法測定腹主動脈中Nrf2表達水平;部分-80℃冷藏用于測定腹主動脈MDA含量。
　　5、統(tǒng)計學分析

6、r>　　符合正態(tài)分布計量資料以(x)±s表示，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，多組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1、一般情況
　　各組大鼠一般狀況良好，體重穩(wěn)定增長，反應(yīng)靈敏。各組大鼠體重差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、注射蛋黃乳液24h后大鼠血脂升高，表現(xiàn)為TC、TG、LDL-C升高，HDL-C降低，認為急性高脂血癥模型成

7、立。
　　3、血脂水平
　　3.1模型組大鼠血脂與NC組比較結(jié)果
　　與NC組比較，模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高，血清HDL-C水平降低(P＜0.05)。
　　3.2藥物干預(yù)組大鼠血脂與模型組比較結(jié)果
　　HC組、他汀組血清TC、TG水平均較模型組降低(P＜0.05); LC組血清TC、TG較模型組有降低趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　LC組、HC組、他汀組血清LDL-C水

8、平較模型組均有降低趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　HC組血清HDL-C與模型組比較，無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。LC組、他汀組血清HDL-C則較模型組降低(P＜0.05)。
　　3.3藥物干預(yù)組間血脂比較結(jié)果
　　HC組、LC組、他汀組TC、TG、LDL-C水平無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　HC組血清HDL-C較LC組、他汀組升高(P＜0.05)，LC組、他汀組血清HDL-C無統(tǒng)計學差異（P＞

9、0.05）。
　　4、肝功能、葡萄糖水平
　　各組大鼠肝功能指標、血糖無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　5、腹主動脈HE染色結(jié)果
　　NC組大鼠腹主動脈內(nèi)膜光滑、完整，無隆起，平滑肌及彈力纖維排列規(guī)則，未見平滑肌細胞增生，外膜未見異常;模型組大鼠腹主動脈內(nèi)膜不連續(xù)，局部隆起，部分脫落，中膜平滑肌細胞及彈力纖維排列紊亂，外膜未見異常。LC組大鼠腹主動脈內(nèi)膜連續(xù)，局部隆起，彈力纖維、平滑肌細胞排列不規(guī)則;HC組大鼠

10、腹主動脈內(nèi)膜完整，無隆起，彈力纖維及平滑肌細胞排列稍不規(guī)則;他汀組大鼠腹主動脈內(nèi)膜完整，局部可見隆起，彈力纖維及平滑肌細胞排列不規(guī)則。
　　6、免疫組織化學結(jié)果
　　模型組腹主動脈的Nrf2陽性細胞數(shù)較NC組增加（+44％，P＜0.05）。與模型組相比，LC組（+69％，P＜0.05）、HC組（+147％，P＜0.05）和他汀組（+51％，P＜0.05）的Nrf2陽性細胞數(shù)均顯著增加。與他汀組比較，LC組（+12％，P＜0.

11、05）Nrf2陽性細胞數(shù)顯著增加，HC組（+64％，P＜0.05）Nrf2陽性細胞數(shù)顯著增加，且HC組（+46％，P＜0.05）Nrf2陽性細胞數(shù)多于LC組。
　　7、SOD、MDA結(jié)果
　　血清SOD活力:模型組SOD活力較NC組減弱(P＜0.05)。LC組、HC組、他汀組SOD活力與模型組相比增強(P＜0.05)。HC組、他汀組SOD活力與LC組比較增強(P＜0.05)，HC組、他汀組SOD活力無統(tǒng)計學差異。
　　

12、腹主動脈MDA含量:模型組MDA含量高于NC組(P＜0.05);LC組、HC組、他汀組的MDA含量低于模型組(P＜0.05)。HC組的MDA含量低于LC組和他汀組(P＜0.05)，LC組、他汀組的MDA含量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　8、血清NO
　　模型組NO含量低于NC組(P＜0.05)。LC組、HC組、他汀組NO含量與模型組相比均有顯著增加(P＜0.05)。HC組NO含量高于LC組和他汀組(P＜0.05)，LC

13、組和他汀組NO含量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　9、oxLDL結(jié)果
　　模型組血清oxLDL含量高于NC組(P＜0.05)。HC組、他汀組的oxLDL含量與模型組相比降低(P＜0.05)，LC組oxLDL含量與模型組相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。HC組和他汀組oxLDL含量均低于LC組(P＜0.05)，HC組和他汀組oxLDL含量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、應(yīng)用75％蛋黃乳液腹腔

14、注射成功制備急性高脂大鼠模型。急性高脂大鼠模型出現(xiàn)了腹主動脈內(nèi)皮損傷，包括形態(tài)學改變（內(nèi)膜不光滑）和功能損傷（NO含量降低）;急性高脂大鼠抗氧化能力減弱表現(xiàn)為脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物oxLDL、MDA增加，SOD活力減弱。
　　2、低劑量姜黃素（125mg/kg.d姜黃素化合物）、高劑量姜黃素（250mg/kg.d姜黃素化合物）及阿托伐他汀均可降低急性高脂血癥模型大鼠血脂，250mg/kg.d降脂效果優(yōu)于125mg/kg.d。姜黃素和阿托伐