相思根瘤菌質粒的研究.pdf

1、本文研究了20株相思根瘤菌株對5種常見抗生素的抗性，并對它們的質粒分布進行了研究。在此基礎上，運用接合轉移的方法把質粒pMC73A從供體菌催娩克斯菌NG13引入受體菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，并對接合子進行了結瘤試驗、耐氨試驗及固氮酶活性分析。結果顯示： 1、參試的20株菌株對抗生素的抗性有明顯的差異。絕大多數(shù)的菌株對Km、Sm敏感，其中YM2菌株對所有的抗生素都敏感，而菌株4-2對所有的抗生素都具有抗性，確定Tc為相思根瘤

2、菌MZ、AJ018抗性篩選標記。 2、通過比較三種質粒檢測的方法，確定了堿裂解法為相思根瘤菌的質?？焖贆z測方法。采用該方法對20株相思根瘤菌的質粒分布進行了檢測，發(fā)現(xiàn)相思根瘤菌都只含有一個質粒，而菌株LR005沒有檢測到質粒。實驗過程中，對質粒檢測的條件進行了優(yōu)化，確定相思根瘤菌質粒檢測的菌液量為20ml。 3、運用接合轉移的方法把質粒pMC73A從供體菌催娩克斯菌NG13引入受體菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，接合頻率

3、都為10-8數(shù)量級。對接合子電泳檢測表明，MZ接合子能檢測到質粒pMC73A條帶，而AJ018接合子未能檢測出。接合子的質粒穩(wěn)定性研究顯示，質粒在宿主菌中具有一定的穩(wěn)定性。 4、對34株接合子菌株進行結瘤實驗。結果顯示，所有的接合子菌株都能在馬占相思的根部形成根瘤。篩選出6株結瘤能力高于野生型相思根瘤菌的菌株：MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。 5、通過結瘤實驗，篩選出了6個相思根瘤菌接合子，即菌株MZ1

4、、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。這6個相思根瘤菌接合子的耐氨實驗和固氮酶活性研究表明：所有的菌株在(NH4)2SO4濃度為100mmolL-1、300mmolL-1、500mmolL-1的液體培養(yǎng)基中都能較好的生長，但各菌株在10mmolL-1(NH4)2SO4條件下不能正常固氮，不過仍具有一定的固氮能力，其固氮酶活性值(nmolml-1h-1)為：MZ1：31.231；MZ2：30.289；MZ4：29.632；MZ12：