芥菜幾丁質(zhì)酶基因BjCHI1啟動(dòng)子功能的初步分析.pdf

1、芥菜(1Brassica iuncea)幾丁質(zhì)酶基因BjCHIL受傷害、茉莉酸、蟲食、真菌侵染等的誘導(dǎo)，因此BjCHIL啟動(dòng)子是一個(gè)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。目前報(bào)道的轉(zhuǎn)基因作物中，驅(qū)動(dòng)導(dǎo)入的外源基因表達(dá)大多數(shù)是強(qiáng)表達(dá)的組成型啟動(dòng)子，使得這些基因幾乎在轉(zhuǎn)基因植物的所有部位和所有發(fā)育階段都高效表達(dá)，這無(wú)疑增加了植株的代謝負(fù)擔(dān)，造成物質(zhì)和能源上的巨大浪費(fèi)。因此，研究和利用組織器官特異性啟動(dòng)子和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子具有非常重要的應(yīng)用價(jià)值和理論意義。本研究的主要目

2、的是將芥菜BjCHIl啟動(dòng)子導(dǎo)入煙草，初步鑒定該啟動(dòng)子的功能。 本研究通過(guò)銜接頭：PCR技術(shù)，于芥菜BjCHIl啟動(dòng)子BjC-p(1098bp)5、端成功延伸了280bp的片段，獲得長(zhǎng)度為1378bp的芥菜BjCHIl全長(zhǎng)啟動(dòng)子BjC-p1，將其序列與GenBank中已知序列進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)在GenBank中目前還沒(méi)有該啟動(dòng)子的注冊(cè)信息。 為了驗(yàn)證其功能，用芥菜BjCHIl啟動(dòng)子片段BjC-pO(1287bp)取

3、代pBll21上的35S啟動(dòng)子，構(gòu)建成植物表達(dá)載體pBICHPO。用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將攜帶芥菜BjCHIl啟動(dòng)子片段的植物表達(dá)載體pBICHPO、pBICHP2和pBICttP5以煙草K326無(wú)菌苗葉片為轉(zhuǎn)化受體進(jìn)行浸染轉(zhuǎn)化?？偣搏@得103株P(guān)CR陽(yáng)性煙草植株，其中29株pBICHPO、2l株pBICHP2和0株pBICttP5為GUS陽(yáng)性植株。 對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草(苗期4葉期)的GUS活性分析表明：(1)BjC-pO和BiC-p2

4、驅(qū)動(dòng)的GUS基因在傷害處理前幾乎沒(méi)有活性，但傷害處理3h之后，BjC-pO的GUS活性是處理前的29.85倍，BjC-p2的GUS活性是處理前的2.71倍；誘導(dǎo)處理后GUS活性強(qiáng)度為BjC-p0大于BjC-p2；(2)BjC-p5在傷害處理前后幾乎沒(méi)有活性，且變化不大，以上結(jié)果與GUS組織化學(xué)染色結(jié)果相符；(3)當(dāng)轉(zhuǎn)基因煙草生長(zhǎng)至大于苗期4葉期時(shí)，傷害誘導(dǎo)前后BjC-p0、BjC-p2的GUS基因活性變化不大，表達(dá)強(qiáng)度為BjC-p0大于