小鼠胚胎Sry基因的RNA干涉研究.pdf

1、為了研究Sry基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，采用siRNA技術(shù)使Sry基因沉默，探討了有效沉默Sry基因的途徑和最佳條件。 我們?cè)O(shè)計(jì)、合成針對(duì)小鼠Sry基因的發(fā)夾狀寡核苷酸鏈，退火后連入真核表達(dá)載體pSilencer4.1-CMVneovector，構(gòu)建以小鼠Sry基因?yàn)榘悬c(diǎn)的siRNA干涉載體pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565，通過尾靜脈注射法將載體質(zhì)粒導(dǎo)入妊娠小鼠體內(nèi)，于小鼠妊娠第11.5天，即

2、11.5dpc(dayspostcoitum，性交后天數(shù))取出胚胎，采用雙重PCR法對(duì)胚胎進(jìn)行性別鑒定，鑒定為雄性的胚胎采用半定量RT-PCR法檢測Sry基因的表達(dá)量，研究不同干擾序列、不同注射時(shí)間及注射劑量對(duì)Sry基因表達(dá)量的影響。 研究結(jié)果，確定了質(zhì)粒的最佳注射時(shí)間為9.5dpc，注射劑量為20μg，注射干擾質(zhì)粒pSilencer4.1/Sry565對(duì)Sry基因的抑制效率達(dá)85％左右。表明：siRNA可以顯著抑制雄性胚胎Sr