低氧對肝癌HepG2細胞HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表達及增殖能力的影響.pdf

1、目的：
　　利用氯化鈷(CoCl2)建立肝癌HepG2細胞的體外低氧模型，觀察不同時間段的肝癌HepG2細胞在不同濃度CoCl2模擬的低氧化境中的增殖能力的變化，并討論其可能的原因。測定不同程度低氧對肝癌HepG2細胞中蛋白HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax的表達情況，并考慮其原因和帶來的生物學效應。
　　方法：
　　用不同濃度的CoCl2(0μmol/L、50μmol/L、100mmol/L、200μmol/

2、L、300μmol/L、500μmol/L)模擬不同程度的低氧環(huán)境，在低氧環(huán)境中用不同的時間(12h、24h、48h、72h)培養(yǎng)肝癌HepG2細胞，誘導其缺氧，用CCK-8法檢測不同程度低氧下HepG2細胞增殖能力的變化。
　　用不同濃度的CoCl2（0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L）模擬不同程度的低氧環(huán)境，在低氧環(huán)境中培養(yǎng)肝癌HepG2細胞48h，

3、通過蛋白印跡法(Western Blot，WB)測定低氧環(huán)境中細胞內HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表達的變化。
　　結果：
　　經CCK-8法測定，結果示在一定濃度范圍以內(≤100μmol/L)的CoCl2對HepG2細胞增殖能力的影響不明顯。當CoCl2濃度增加(≥200μmol/L)會抑制肝癌HepG2細胞的增殖能力，且濃度越高，抑制程度越強。
　　經WB法檢測，結果示HIF-lα蛋白在50μmo

4、l/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L濃度組相對灰度值依次為（0.277±0.003）、（0.272±0.003）、（0.333±0.005）、（0.364±0.003）、（0.366±0.008），與常氧組的相對灰度值(0.122±0.002)相比均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);低氧組中，50μmol/L濃度組和100μmol/L濃度組之間、300μmol/L濃度組和500μmol/L濃

5、度組的相對灰度值之間無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，其他相鄰組之間均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。VEGF蛋白在50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L濃度組相對灰度值依次為(0.268±0.003)、（0.368±0.009）、（0.450±0.007）、（0.535±0.010）、（0.584±0.015），與常氧組的相對灰度值（0.149±0.003）相比均有統(tǒng)計學意義(P＜0

6、.05);低氧組的相對灰度值與前一濃度組比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Bcl-2蛋白在50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L濃度組相對灰度值依次為（0.439±0.003）、（0.399±0.005）、（0.322±0.004）、（0.263±0.001）、（0.124±0.002），與常氧組的相對灰度值（0.445±0.003）相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);低氧

7、組的相對灰度值與前一濃度組比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Bax蛋白在50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L濃度組相對灰度值依次為（0.362±0.005）、（0.455±0.007）、（0.480±0.009）、（0.506±0.006）、（0.541±0.014），與常氧組的相對灰度值（0.243±0.003）相比之間差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);低氧組的相對灰度值

8、與前一濃度組比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在低氧下細胞中的HIF-1α、VEGF、Bax蛋白的表達均增加，并且蛋白的表達程度與低氧程度成正比;Bcl-2蛋白在低氧下的表達受到抑制，并且蛋白的表達程度與低氧程度成反比。
　　結論：
　　通過不同濃度CoCl2建立肝癌HepG2細胞的體外低氧模型，一定濃度范圍以內(≤100μmol/L)的CoCl2對HepG2細胞增殖能力的影響不明顯，過高濃度的CoCl2(≥200μmol