操縱細胞CaM水平對轉(zhuǎn)基因煙草脯氨酸代謝的影響.pdf

1、本論文以實驗室建立的誘導(dǎo)表達細胞CaM的轉(zhuǎn)基因煙草體系為實驗材料，研究了細胞CaM水平與脯氨酸代謝之間的關(guān)系。研究工作包括以下幾個方面： 1、良好誘導(dǎo)表達細胞核CaM轉(zhuǎn)基因煙草株系的篩選　　利用改進的磷酸二酯酶法測定26株誘導(dǎo)表達細胞核CaM的T2系列轉(zhuǎn)基因煙草的CaM活性，從中篩選出了四個能良好誘導(dǎo)表達的轉(zhuǎn)基因煙草株系(T2.1、T2.25、T2.19和T2.34)；隨后進一步研究了Tc誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因煙草幼苗48小時以及葉圓片4

2、8小時過程中CaM活性的動態(tài)變化。 2、操縱CaM水平對正常生長條件下轉(zhuǎn)基因煙草幼苗脯氨酸代謝的影響 以第一部分檢測到的良好誘導(dǎo)表達細胞核CaM的轉(zhuǎn)基因煙草T2.1、T2.25和誘導(dǎo)表達細胞質(zhì)CaM的轉(zhuǎn)基因煙草T1.1幼苗為材料，研究正常生長條件下CaM水平變化和脯氨酸代謝的聯(lián)系。 3、操縱CaM水平對滲透脅迫下轉(zhuǎn)基因煙草葉圓片脯氨酸代謝的影響　　用90天大的上述轉(zhuǎn)基因煙草株系葉圓片研究了滲透脅迫(5％PEG6

3、000)下CaM水平變化對脯氨酸代謝的影響。結(jié)果表明：滲透脅迫下，隨著處理時間延長，四種葉圓片材料(無Tc誘導(dǎo))的脯氨酸含量迅速上升，96小時時脯氨酸含量比正常生長條件下高出約5倍；而Tc誘導(dǎo)可顯著增強三個誘導(dǎo)表達細胞CaM的轉(zhuǎn)基因煙草株系(T2.1、T2.25、T1.1)在滲透脅迫下積累脯氨酸的能力。滲透脅迫下CaM對脯氨酸代謝的作用機理與正常生長條下有所不同。CaM水平上調(diào)不僅增強了谷氨酸途徑在脯氨酸合成中的貢獻，而且活化了脯氨酸合