兔舌鱗癌細胞系RSCC-1a的建立及生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的：建立一株純種新西蘭白兔舌癌細胞系，并對細胞系的生物學(xué)特性進行鑒定和分析，為進一步研究舌癌的發(fā)生機制、發(fā)展規(guī)律及治療方法奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法：⑴通過RSCC-1細胞懸液法建立兔舌癌動物實驗?zāi)Ｐ?，運用Transwell Permeable Supports原代培養(yǎng)法和組織塊貼壁法對成瘤組織進行原代培養(yǎng)，并比較兩種方法的優(yōu)缺點。⑵通過反復(fù)差異貼壁法和消化排除法對培養(yǎng)細胞進行純化。⑶生物學(xué)特性研究：通過掃描電鏡和透射電鏡對培養(yǎng)細

2、胞進行形態(tài)學(xué)描述和研究；制備細胞染色體標(biāo)本，油鏡下隨機選取樣本細胞，統(tǒng)計細胞染色體眾數(shù)；運用CCK-8試劑盒測定細胞生長周期內(nèi)OD值，繪制細胞生長曲線，判定細胞活力；通過流式細胞儀測定細胞周期，分析各期特征；運用廣譜角蛋白（pan-CK）和波形蛋白（Vimentin）進行免疫細胞化學(xué)檢測,確定組織來源；進行細胞同種異體（新西蘭白兔）成瘤實驗和異種（裸鼠）成瘤實驗，并計算成瘤率。
　　結(jié)果：①建立了一株新西蘭白兔舌鱗癌細胞系，并命名

3、為“RSCC-1a”，現(xiàn)已穩(wěn)定連續(xù)傳至30代。②RSCC-1a的生物學(xué)特性：細胞形態(tài)學(xué)：細胞為多角形，呈現(xiàn)典型的鋪路石狀（倒置顯微鏡）；細胞周邊分布微絨毛，細胞內(nèi)部細胞器（線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）大量存在，細胞間連接緊密，觀察到橋粒、張力原纖維典型細胞超微結(jié)構(gòu)（電鏡）；染色體特征：染色體眾數(shù)分布在75-105條之間，51.82％細胞染色體數(shù)目分布在91-95條之間，30.91%細胞染色體數(shù)目分布在86-90條之間；RSCC-1a細胞染色體數(shù)目異

4、常，多為超四倍體和四倍體；細胞行為學(xué)：RSCC-1a細胞生長曲線呈“S”型，分為潛伏期、對數(shù)生長期和平臺期；以15代RSCC-1a細胞的周期分布為例：G1期細胞占79.92%，S期細胞占12.16%，G2期細胞占7.92%，G2/G1=1.80；免疫原性：廣譜角蛋白（pan-CK）免疫反應(yīng)呈陽性，波形蛋白（Vimentin）表達陰性；成瘤特性：同種異體（兔）成瘤率為100%，異種（鼠）成瘤率為100%。
　　結(jié)論：成功建立新西蘭白