紅曲霉產(chǎn)酯化酶特性及其酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、紅曲霉(Monascus)其發(fā)酵產(chǎn)物紅曲古代稱丹曲，起源于中國(guó)，很早便被用于制酒、釀造食品、醫(yī)藥等。紅曲霉能產(chǎn)生多種對(duì)人類有益的代謝產(chǎn)物。酯化酶作為其代謝產(chǎn)物之一，具有多向合成功能，既能催化酯的合成,也能催化酯的分解，具有廣泛的市場(chǎng)應(yīng)用前景。本論文首先對(duì)四株紅曲霉菌株進(jìn)行產(chǎn)液態(tài)酯化酶能力的篩選，篩選出一株最佳菌株。然后對(duì)其培養(yǎng)基組成成分、培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，從而獲得最大產(chǎn)酶量。最后對(duì)分離純化出酯化酶進(jìn)行了酶學(xué)相關(guān)性質(zhì)的研究。主要試驗(yàn)結(jié)果如

2、下：
　　1.通過(guò)對(duì)四株紅曲霉菌株Monascus sp.ZZ、Monascus ruber ZK、Monasucs purpureus GX、Monasucs sp.XM的篩選。得到高產(chǎn)液態(tài)酯化酶的菌株Monascus ruber ZK，其液體產(chǎn)酶水平為203.4U/mL，總酶活9061.1U。
　　2.對(duì)培養(yǎng)基中碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽進(jìn)行了單因子以及正交實(shí)驗(yàn)。確定紅曲霉Monascus ruber ZK的最佳培養(yǎng)基組成為可溶

3、性淀粉35g/L,葡萄糖35g/L,蛋白25g/L,NaNO32g/L,MgSO41.0g/L,KH2PO4l.5g/L；驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，以最佳組合條件B2A2C2D1發(fā)酵時(shí)，酯化酶酶活力達(dá)293.8U/mL。
　　3.對(duì)培養(yǎng)條件中的溫度、初始pH值、接種量、裝液量、搖床轉(zhuǎn)速等影響因素進(jìn)行了單因子實(shí)驗(yàn)。隨即選取了溫度、初始pH值、接種量、搖床轉(zhuǎn)速四個(gè)最佳單因子做四因素三水平正交實(shí)驗(yàn)。確定紅曲霉Monascus ruber ZK的最佳

4、條件為溫度32℃，初始pH值5.0、接種量10％、裝液量為60mL(250mL三角瓶)，搖床轉(zhuǎn)速160r/min。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，以最佳組合條件B2A2C2D1發(fā)酵時(shí)，酯化酶酶活力312.1U/mL。
　　4.粗酶液經(jīng)硫酸銨分級(jí)鹽析，用Sephadex G-25柱層析脫鹽，使用Sephadex G-100對(duì)酶液進(jìn)行分離純化，我們得出酯化酶回收率是25.3％，純化倍數(shù)是7.6。
　　5.酯化酶最適酶活溫度40℃，最適pH為5.3