mPRβ在豬卵母細胞體外成熟過程中的表達和作用的研究.pdf

1、孕激素膜受體(membrane progestin receptors，mPRs)，是最近發(fā)現(xiàn)的一個大的蛋白家族成員，包括α、β和γ三種亞型。以往研究顯示，它們在低等脊椎動物卵母細胞成熟過程中起著重要的作用。但是，到現(xiàn)在為止，還沒有它們在哺乳動物卵母細胞成熟過程中的表達和作用的相關(guān)研究。 為了檢測mPR β mRNA是否在豬卵母細胞一卵丘細胞復(fù)合體(oocyte-cumulus complexes，COCs)中表達，本實驗利用G

2、eneBank上豬mPRβ的eDNA序列設(shè)計引物，擴增出了一段1447bp序列，并將所得序列進行了測序和BLAST比對。結(jié)果顯示，所測得的序列與GeneBank上cDNA序列的同一性為100％，說明mPRβ mRNA在豬的COCs中有表達。隨后，用半定量RT-PCR，分析了豬COCs體外成熟過程中，0h，12h，20h，36h和44h五個時期mPR β mRNA的表達情況。結(jié)果顯示，20h和36h mPR β mRNA的表達量顯著高于0

3、h(P(0.05)，其它各組間沒有顯著差異。在整個成熟過程中，mPRβ mRNA的表達呈先升高后降低的趨勢，并在20h達到峰值。為了研究促性腺激素對mPR β mRNA的表達是否有影響，將成熟培養(yǎng)液中的LH或FSH去除。結(jié)果顯示，去除培養(yǎng)液中的LH或FSH，對mPR β mRNA的表達沒有顯著的影響。 以上在轉(zhuǎn)錄水平上對mPR β在豬COCs中的表達進行了分析。為了進一步在翻譯水平上研究mPR β在豬COCs中表達的規(guī)律，利用m

4、PR β的一段多肽制備了抗體，進行蛋白分析。Western blotting結(jié)果顯示，在0h沒有mPRβ表達，在20h有高的表達量，而在44h其表達量又降到很低水平。三個時期的表達量之間差異顯著(P<0.05)。免疫熒光分析顯示，mPR β至少部分定位在卵丘細胞的膜上。而在小鼠的胎兒成纖維細胞(mouse embryo fibroblasts，MEFs)中，mPR β主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。在豬COCs的成熟培養(yǎng)液中添加10％的抗血清mPR