GSTM潛抑制劑對(duì)耐順鉑腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外增敏作用.pdf

1、惡性腫瘤對(duì)人體的健康存在嚴(yán)重危害。惡性腫瘤常用的治療方式為化療。順鉑是肺癌、卵巢癌的一線化療藥物。這些腫瘤對(duì)順鉑耐藥往往導(dǎo)致治療失敗。在順鉑耐藥的多種機(jī)制中，以GST過(guò)表達(dá)介導(dǎo)的腫瘤耐藥機(jī)制普遍存在于耐藥腫瘤細(xì)胞中。為解決順鉑化療耐藥這一大難題，以GST為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)低毒高效的腫腫瘤耐藥增敏劑并試圖用于臨床勢(shì)在必行。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，自主合成的芳香酰胺類高同工酶選擇性GSTM抑制劑EBEA對(duì)卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP,

2、COC1/DDP具有明顯的增敏作用。在此基礎(chǔ)上，本文檢測(cè)了EBEA同系列化合物對(duì)耐順鉑細(xì)胞的增敏作用，發(fā)現(xiàn)EDEA對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3/DDP，肺癌A549/DDP具有明顯增敏作用，構(gòu)建其移植瘤模型，發(fā)現(xiàn)EDEA與順鉑聯(lián)用對(duì)移植瘤生長(zhǎng)具有抑制作用。EDEA對(duì)卵巢癌細(xì)胞COC1/DDP具有潛在抗腫瘤作用。以下是本研究運(yùn)用到的方法，以及結(jié)果結(jié)論：
　　CCK-8細(xì)胞增殖凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EDEA對(duì)正常細(xì)胞HEK293、LO2毒性作用，低毒

3、劑量均為1μM；還檢測(cè)了對(duì)各腫瘤細(xì)胞株：SKOV3,SKOV3/DDP,COC1,COC1/DDP，A549,A549/DDP的毒性作用，在低毒劑量下，測(cè)定EDEA對(duì)SKOV3/DDP,A549/DDP增敏作用，發(fā)現(xiàn)2μM的EDEA對(duì)SKOV3/DDP，A549/DDP增敏3倍左右。
　　用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了不同的耐藥細(xì)胞株經(jīng)藥物處理后細(xì)胞凋亡情況，在正常細(xì)胞耐受的EDEA濃度下，EDEA與低濃度順鉑聯(lián)用，與對(duì)照組相比細(xì)胞凋亡率增加

4、。
　　Western-blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、Bcl-xL、Bak、Bax和Bcl-2表達(dá)。發(fā)現(xiàn)一定濃度EDEA作用后，耐藥細(xì)胞對(duì)DDP敏感性增加，Western-blot檢測(cè)顯示抑制劑與低濃度的DDP協(xié)同作用于耐藥細(xì)胞時(shí)，Bcl-2家族中促進(jìn)凋亡的蛋白表達(dá)量增加，而抑制凋亡的蛋白表達(dá)減少。
　　用皮下成瘤的方法構(gòu)建了裸鼠移植瘤模型，觀察EDEA與順鉑聯(lián)用治療腫瘤的效果。將SKOV3/DDP,A549/DDP

5、細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，將其以1×107/site接種于Balb/C裸鼠背部皮下，建立人卵巢癌耐藥動(dòng)物模型和人非小細(xì)胞肺癌耐藥動(dòng)物模型。隨機(jī)分為4組，溶劑組給予含0.2%吐溫80和1%DMSO生理鹽水，DDP組給予順鉑，EDEA組給予雙依他尼酰乙二胺，聯(lián)用組同時(shí)給予順鉑DDP和依他尼酰乙二胺EDEA，腹腔注射，每3/4天給藥1次，共6/8次，觀察各組成瘤情況，腫瘤生長(zhǎng)情況，以及不同處理組對(duì)裸鼠體重，裸鼠的食欲精神狀態(tài)。整個(gè)過(guò)程測(cè)量腫瘤瘤體積變化，

6、制作腫瘤生長(zhǎng)曲線，治療結(jié)束后，處死，取瘤，稱重，HE染色，TUNEL法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的凋亡率，免疫組化檢測(cè)CD31表達(dá)，Ki67表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)SKOV3/DDP模型鼠在第三次給藥后聯(lián)用組相對(duì)于對(duì)照組，瘤體積小，P＜0.05。在接下來(lái)的給藥過(guò)程中，差異越來(lái)越顯著P＜0.01。A549/DDP模型鼠在治療第六次后聯(lián)用組相對(duì)于對(duì)照組，瘤體積小，P＜0.05。TUNEL染色發(fā)現(xiàn)聯(lián)用組瘤組織凋亡細(xì)胞明顯多于對(duì)照組，P＜0.05。Ki67染色發(fā)現(xiàn)聯(lián)用

7、組增殖細(xì)胞明顯少于對(duì)照組，P＜0.05。
　　綜上所述，本研究從細(xì)胞水平，動(dòng)物水平，蛋白水平驗(yàn)證了EDEA對(duì)耐順鉑細(xì)胞SKOV3/DDP,A549/DDP,COC1/DDP增敏作用。發(fā)現(xiàn)低濃度的EDEA聯(lián)合低濃度的順鉑對(duì)耐藥株SKOV3/DDP,A549/DDP能發(fā)揮顯著的增敏作用，EDEA聯(lián)合順鉑對(duì)移植瘤模型生長(zhǎng)抑制作用，進(jìn)一步驗(yàn)證了EDEA對(duì)耐藥株的增敏作用。EDEA對(duì)COC1/DDP雖不能發(fā)揮增敏作用，但在低于正常細(xì)胞低毒劑