海藻糖改善枯草芽孢桿菌電轉(zhuǎn)化方法的研究.pdf

1、基因的轉(zhuǎn)化法是枯草芽孢桿菌進行遺傳分析的重要手段?？莶菅挎邨U菌是一種含有芽孢的常用的轉(zhuǎn)化外源基因的革蘭氏陽性菌。目前，已有多種野生型枯草芽孢桿菌被分離，并且可以產(chǎn)生抗菌物質(zhì)大概二十多種。這些抗菌物質(zhì)結(jié)構(gòu)各異，并且可產(chǎn)生多種水解酶?？莶菅挎邨U菌所擁有的革蘭氏陽性菌表達系統(tǒng)，具有許多革蘭氏陰性菌如大腸桿菌不具備的不同蛋白的表達能力，目前，利用基因轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化外源基因已經(jīng)作為一種現(xiàn)代基因手段廣泛用于工業(yè)微生物的改良。但是，這些技術(shù)的應(yīng)用基于一

2、個條件，即所用的微生物必須具備可轉(zhuǎn)化的條件。報道表明，造成轉(zhuǎn)化效率過低的原因之一是由于較低的感受態(tài)水平?？莶菅挎邨U菌感受態(tài)的形成是在T0時期，即菌體生長的對數(shù)生長期到穩(wěn)定期。這個過程的控制主要受到兩種信息素的調(diào)節(jié)：ComX和CSF（感受態(tài)因子及感受態(tài)刺激因子）。這兩種信息素的產(chǎn)生及釋放與細胞生長的濃度具有協(xié)同作用。由于感受態(tài)活力低以及一些非自然感受態(tài)的原因?qū)е乱恍┪⑸锊痪邆滢D(zhuǎn)化的條件，之后各國的研究學者陸續(xù)發(fā)明了其他的轉(zhuǎn)化方法如噬菌體

3、轉(zhuǎn)導，利用細胞融合電轉(zhuǎn)化以及原生質(zhì)體的電穿孔技術(shù).但是由于大部分野生型的枯草芽孢桿菌感受態(tài)水平較低從而難于轉(zhuǎn)化，因此，找到合適的枯草芽孢桿菌感受態(tài)時期尤為重要，造成轉(zhuǎn)化效率低的其他原因還有如較小的電場強度，不適合轉(zhuǎn)化的外源基因載體，枯草芽孢桿菌相對較厚的細胞壁及電擊后的細胞存活率低等等。因此，尋找到合適的電擊保護液用來保護受到電脈沖傷害的細胞并且同時可以增大電場強度以提高轉(zhuǎn)化效率尤為重要。
　　 海藻糖（α-D-glucopyr

4、anosyl，α-D-glucopyranoside）是穩(wěn)定，無色，無味的非還原性雙糖，在自然界中廣泛分布，尤其是那些具有較強抗脫水作用的生物體，這些生物體甚至在喪失了身體99％水分的情況下仍能生存。早些時候海藻糖被用作碳源，在隨后的研究中發(fā)現(xiàn)當面對外界壓力的反應(yīng)時會產(chǎn)生海藻糖，研究表明，同其它的寡糖類相比，海藻糖具有最好的水合作用，這說明海藻糖對于穩(wěn)定雙分子細胞膜的水分子排列有作用或者當水分子被除去時可以直接影響生物分子的極性，由此我