2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、本研究主要通過基因重組的方法,將CecropinB和腫瘤血管生長抑制因子Kringle5的編碼基因連接到高效的大腸桿菌表達載體pET32a上進行融合表達。首先根據(jù)GenBank中抗菌肽CecropinB基因序列和相關(guān)資料,利用大腸桿菌偏愛密碼子設(shè)計抗菌肽CecropinB基因序列,將整個基因劃分為A、B、C、D共4個片段,分別合成。通過重疊區(qū)擴增法(Genesplicingmethodofoverlapextension,geneSOE

2、ing)合成完整的天蠶抗菌肽基因。根據(jù)腫瘤血管生長抑制因子Kringle5基因上下游的堿基序列設(shè)計上下游引物,通過PCR以已有的含有該基因的質(zhì)粒為模板擴增出完整的Kringle5基因。將PCR擴增出來的CB基因、K5基因和表達性載體pET32a分別用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶切割后,凝膠電泳回收目的條帶,然后用T4DNA連接酶將三者連接。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細胞BL21(DE3)中,經(jīng)酶切鑒定和測序,表明CB-K5基因已經(jīng)正確地連接到p

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