卵母細胞獲得成熟潛能的溫度依賴性機制中cdc25和mos的表達與作用分析.pdf

1、該實驗室過去的工作證實:低溫是中華大蟾蜍卵母細胞獲得成熟潛能的關鍵;孕酮處理后的高溫卵雖無能成熟卻發(fā)生了成熟過程早期階段的變化,如孕酮刺激導致胞內(nèi)cAMP濃度下降,Ca<'2+>濃度上升等,但成熟促進因子(maturation promoting factor,MPF)未被激活;有活性的MPF注入高溫卵中無法自催化擴增;孕酮刺激高溫卵后,細胞質(zhì)中無MPF,但注入低溫卵中卻能促使卵成熟.這些結(jié)果表明在中華大蟾蜍高溫卵中或者MPF組分存在缺

2、失,或者MPF自催化擴增循環(huán)中的組分存在缺失,再或者孕酮誘導MPF活化的信號通路中被阻斷,而導致高溫卵不具備成熟潛能.孕酮誘導卵母細胞成熟的信號通路中,c-Mos蛋白的新合成被證實是孕酮誘導卵母細胞成熟所必需,它激活MAPK并誘導一連串激酶的級聯(lián)效應最終激活MPF,是位于信號通路上游的關鍵分子.因此該文就c-Mos在中華大蟾蜍高溫卵和低溫卵中的表達水平進行了分析,結(jié)果顯示c-mos在兩種卵中的表達沒有差異,也就排除了c-Mos影響高溫卵

3、喪失成熟潛能的可能性.已知MPF由催化亞單位p34<'cdc2>(CDK1)及調(diào)節(jié)亞單位Cyclin B組成,在經(jīng)歷了量的積累,兩亞單位的結(jié)合,磷酸化和去磷酸化后才完全活化.CDC25是一種雙特異性磷酸酶,在細胞周期過程中,它完成針對CDK1的14位Thr和15位Tyr的去磷酸化,從而使CDK1完全活化.活化后的CDK1又通過級聯(lián)反應磷酸化和活化CDC25,參與MPF自催化擴增循環(huán).因此作為MPF自擴增循環(huán)重要組分之一,有必要了解高溫卵

4、和低溫卵中cdc25的表達情況.該文利用簡并引物結(jié)合RACE的方法克隆到中華大蟾蜍cdc25基因全長cDNA序列并登錄了GenBank,序列號為AY491052.其演繹的氨基酸序列經(jīng)過blastp進行蛋白序列同源性分析后,結(jié)果表明其與已經(jīng)克隆的非洲爪蟾CDC25A同源性最高,一致性高達67﹪,而與人和鼠的CDC25A也具有高于50﹪的一致性和高于60﹪的相似性,且C端功能結(jié)構(gòu)域的同源性更高,因此我們將其暫定名為tcdc25A.隨后運用N