2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、該文用6月齡大月份流產(chǎn)的新鮮肝臟組織為材料,提取總RNA,通過反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,并以此為摸板,根據(jù)資料設(shè)計(jì)合成引物,經(jīng)PCR得到人Angiostatin基因的AK(1-3)片段.將此PCR產(chǎn)物直接與載體pMD18-T連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α.經(jīng)藍(lán)白斑篩選,PCR和酶切檢測(cè),篩選出陽性克隆,命名為pMDA,測(cè)序證明克隆序列與Gen Bank發(fā)表序列一致.在此基礎(chǔ)上構(gòu)建兩不同的表達(dá)載體:1.用BamHⅠ和BglⅡ酶切pDMA,回收的小片

2、段和BamHⅠ線性化載體pALO247連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,制備質(zhì)粒,電泳檢測(cè)其大小.該文自行設(shè)計(jì)了一段與載體pALO247序列退火的下游引物,與目的片段攜帶的上游引物配合做PCR,依此鑒別連接子的插入方向,得到表達(dá)載體pALOA,該載體在插入位置下游有報(bào)告基因GFP.2.用SalⅠ和BglⅡ酶切pMDA,同時(shí)以相同的酶切割載體pQE40,連接所得基因片段和載體,轉(zhuǎn)化宿主菌M15[pREP4].經(jīng)質(zhì)粒電泳PCR和酶切檢測(cè)篩選陽性克

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