五味子多糖的提取純化及其對(duì)腸道免疫功能的影響.pdf

1、近年來，大量的研究表明五味子多糖具有多種生理保健功能，但是，五味子多糖對(duì)腸道免疫功能的影響尚不清楚。本研究以五味子干果為主要原料，采用超濾的方法制備了具有較高純度的五味子精多糖，研究了五味子精多糖誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，以及對(duì)小鼠腸道免疫調(diào)節(jié)的作用。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.確定五味子精多糖的最佳制備工藝。五味子干粉脫脂后，于55℃熱水中浸提2 h;將提取液通過100 Ku的超濾膜進(jìn)行分離純化，最佳的超濾壓力是0.207Mpa，操

2、作溫度為20℃，超濾時(shí)間30min膜通量基本穩(wěn)定;超濾液除去蛋白后經(jīng)過巴氏滅菌和凍干后得到平均分子量為210ku的五味子精多糖。
　　 2.將制備的五味子精多糖溶于培養(yǎng)基使終濃度分別為0、0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2 mg/L作用于SMMC7721肝癌細(xì)胞，結(jié)果顯示，在短時(shí)間處理(24～48h)時(shí)，五味子多糖對(duì)肝癌細(xì)胞沒有顯著的抑制生長(zhǎng)作用(P＞0.05），較高劑量在24h時(shí)甚至有一定促進(jìn)增殖

3、作用，在較長(zhǎng)處理時(shí)間(72h)時(shí)，五味子多糖表現(xiàn)顯著的肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和促進(jìn)凋亡作用(P＜0.05），其劑量大小與細(xì)胞存活率呈負(fù)相關(guān)。吖啶橙、溴化乙錠染色多糖作用肝癌細(xì)胞72h顯示，空白組細(xì)胞幾乎都呈綠色，形態(tài)完整，貼壁生長(zhǎng)，多糖濃度0.05、0.5、2.0mg/L組別的橙黃色死亡細(xì)胞數(shù)量明顯增加，細(xì)胞的形態(tài)和大小雜亂無章，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞邊緣變得模糊不清，細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象，并與劑量呈正相關(guān)，進(jìn)一步說明了五味子精多糖能夠抑制SMMC772

4、1肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　 3.分別使用高(500mg/Kg·d)、中(200mg/Kg·d)、低劑量（50mg/Kg·d）五味子多糖粉對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行灌胃15天。小腸腸液中SIgA、小腸組織中各主要細(xì)胞因子含量經(jīng)過前7天左右波動(dòng)期后，基本處于穩(wěn)定。在前七天免疫應(yīng)答高峰期，IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10等細(xì)胞因子先后出現(xiàn)峰值，小鼠腸道黏膜免疫系統(tǒng)先后出現(xiàn)細(xì)胞免疫占主導(dǎo)地位、體液免疫占主導(dǎo)地位后免疫應(yīng)答逐漸趨緩。1

5、0～15天長(zhǎng)期灌胃結(jié)果顯示:五味子精多糖可以促進(jìn)腸道SIgA的分泌量，其SIgA的含量與劑量呈正相關(guān)。流式細(xì)胞儀對(duì)腸系膜淋巴結(jié)(MLN)的T淋巴細(xì)胞表型分析顯示，高、中劑量組均能顯著增大CD3+CD4+與CD3+CD8+比例，結(jié)合之前細(xì)胞因子和SIgA含量變化，推斷高、中劑量的五味子多糖是依靠增加CD3+CD4+表型輔助性T細(xì)胞不同亞群細(xì)胞數(shù)量來增大該比例的，其中高劑量組可以增加Th2亞群的細(xì)胞數(shù)量和活性，中劑量組可以增加Th1、Th2

6、亞群細(xì)胞活性和數(shù)量，低劑量組的CD3+CD4+與CD3+CD8+比例同對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05），但可以增加Th1、Th2細(xì)胞的活性。
　　 4.中劑量(200mg/Kg·d)、低劑量（50mg/Kg·d）五味子多糖灌胃可以促進(jìn)腸道黏膜免疫水平，同時(shí)提高體液免疫和細(xì)胞免疫能力，保持腸道免疫平衡，對(duì)抵抗外界異物感染、保證機(jī)體腸道健康最為有利;高劑量組(500mg/Kg·d)可提高腸道體液免疫水平，但造成了腸道細(xì)胞免疫受到抑制