長穗偃麥草中一個(gè)AP2-EREBP類轉(zhuǎn)錄因子的克隆.pdf

1、鹽堿、干早、低溫和凍害等非生物逆境嚴(yán)重影響了植物的生長和發(fā)育。在逆境脅迫下，植物可啟動(dòng)或增強(qiáng)兩類基因的表達(dá)以抵御不利環(huán)境的危害：1）基因編碼的產(chǎn)物為一些功能蛋白和酶類，如LEA，水通道蛋白，脯氨酸合成酶等。2）基因編碼的產(chǎn)物為傳遞信號和調(diào)控基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，如MAP 激酶、bZIP、AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子等。由于植物基因的表達(dá)調(diào)控大多發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，主要受控于順式元件和反式因子。特別是轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)可提高其下游一系列抗逆功

2、能基因的表達(dá)水平，從而提高植物的綜合抗逆性，在抗逆轉(zhuǎn)基因育種中具有重要功能價(jià)值，因此，分離和鑒定優(yōu)異的轉(zhuǎn)錄因子基因是當(dāng)前抗逆分子生物學(xué)研究的重點(diǎn)。
　　 本研究中，以野生長穗偃麥草（2 n=70）為材料，利用簡并引物和RACE 技術(shù)，由RT-PCR 方法得到了一個(gè)由高鹽誘導(dǎo)的AP2/EREBP 類轉(zhuǎn)錄因子序列。首先根據(jù)GenBank中多種植物AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子氨基酸序列的保守區(qū)段設(shè)計(jì)了一對簡并引物，通過RT-PCR 擴(kuò)

3、增出一條117 bp的cDNA片段。經(jīng)Blast 比較及測序驗(yàn)證其正確性后，根據(jù)此片段序列設(shè)計(jì)3'端特異性引物，利用3'RACE 得到1080 bp的3'端cDNA片段，命名為EeAP2-1，GeneBank 注冊號為EU***005，該基因與水稻EREBP2(GeneBank Accession No1.：NM-001069787)同源性最高，達(dá)77％。通過半定量RT-PCR 方法分析了該基因在高鹽脅迫條件下轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。結(jié)果表明，在