茶用菊耐熱體細(xì)胞無性系變異體的研究.pdf

1、茶用菊花不僅具有特殊的飲用價(jià)值，還具有名貴的藥用價(jià)值，深受人們的喜愛。茶用菊花不耐高溫，喜溫暖及冷涼氣候，生長適溫為18～21℃。在武漢地區(qū)，夏季高溫常達(dá)38℃以上，這種高溫環(huán)境能夠直接或間接地影響茶用菊花的生理生化代謝，從而抑制茶用菊花的生長和發(fā)育，其引種、栽培和推廣受到嚴(yán)重的阻礙。隨著茶用菊花的功效不斷被驗(yàn)證，市場對(duì)其數(shù)量與質(zhì)量的要求日益提高。茶用菊花的傳統(tǒng)繁殖方法已不能滿足人們生產(chǎn)和生活的需要。本實(shí)驗(yàn)以杭白菊、毫菊、貢菊、神農(nóng)香菊

2、四種茶用菊花為材料，探討了它們的高溫半致死溫度與耐熱性。同時(shí)，為了獲得茶用菊花耐熱新品種，本實(shí)驗(yàn)采用高溫脅迫與滲透脅迫相結(jié)合的方法進(jìn)行了茶用菊花耐熱體細(xì)胞無性系變異體的離體篩選。主要結(jié)果與結(jié)論如下：
　　 1．茶用菊的高溫半致死溫度與耐熱性經(jīng)過一系列梯度高溫脅迫處理后，對(duì)4種茶用菊花露地苗和組培苗的葉片電導(dǎo)率進(jìn)行了測定和分析，處理溫度和細(xì)胞傷害率之間呈現(xiàn)典型的“S”曲線，通過顯著性驗(yàn)證。通過Logistic方程拐點(diǎn)確定高溫半致死

3、溫度LT50，4種茶用菊花露地苗的高溫半致死溫度為：神農(nóng)香菊51.83℃、杭白菊57.39℃、貢菊55.67℃、毫菊57.00℃；4種茶用菊花組培苗的高溫半致死溫度為：神農(nóng)香菊44.37℃、杭白菊47.83℃、貢菊46.09℃、毫菊47.57℃。4種茶用菊花露地苗和組培苗的抗熱性強(qiáng)弱順序一致，抗熱性順序?yàn)椋汉及拙眨竞辆眨矩暰眨旧褶r(nóng)香菊。
　　 2．茶用菊耐熱體細(xì)胞無性系變異體的離體篩選脅迫溫度為36℃時(shí)，達(dá)到半致死的時(shí)間為15d

4、，當(dāng)外源SA濃度為1 mg/L時(shí)，四種茶用菊花的褐化率最低，分別為37.33％、48.00%、57.33%、66.67%。脅迫溫度為38℃時(shí)，達(dá)到半致死的時(shí)間為9d，當(dāng)外源SA濃度為1 mg/L時(shí)，四種茶用菊花的褐化率最低，分別為32%、45.33%、65.33%、70.67%。比較36℃、38℃及40℃熱脅迫處理，40℃的選擇壓力太大，38℃熱處理達(dá)到半致死的時(shí)間比36℃較短，既節(jié)約了時(shí)間，也避免了由于脅迫壓低培養(yǎng)時(shí)間長而出現(xiàn)的生理生

5、化適應(yīng)。因此為了離體篩選操作和控制的便利，為了提高篩選的效率，為了獲得真正的耐熱變異體，選出的茶用菊耐熱變異體更適合在高溫地區(qū)栽培和生長，以38℃為適宜脅迫溫度，以9d為適宜脅迫時(shí)間，以濃度為1mg/L的外源水楊酸為適宜選擇壓。38℃高溫脅迫與濃度為1mg/L的外源水楊酸滲透脅迫結(jié)合處理9d后材料的褐化率可以作為離體篩選的指標(biāo)。
　　 以四種茶用菊花無菌苗葉片為外植體，在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中添加濃度為1mg/L的SA，25℃恒溫培養(yǎng)

6、2d，然后放在38℃下熱脅迫處理9d，再將材料轉(zhuǎn)移到不含SA的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)三周，培養(yǎng)溫度設(shè)置為25℃。杭白菊和神農(nóng)香菊未獲得變異植株，亳菊獲得變異植株入選系B1、B2、B3，貢菊獲得變異植株入選系G1、G2。
　　 3．耐熱體細(xì)胞無性系變異體的初步鑒定在室溫和高溫條件下，變異植株的游離脯氨酸的含量、SOD活性和MDA的含量與普通植株有顯著的差異，變異植株的游離脯氨酸的含量、SOD活性通植株高，且MDA的含量與普通植株相比