抗草甘膦基因植物雙價(jià)表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、本文針對(duì)目前報(bào)道的抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物中，強(qiáng)組成型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)抗草甘膦基因在轉(zhuǎn)基因植物的所有部位和所有發(fā)育階段都表達(dá)，增加植株代謝負(fù)擔(dān)，對(duì)植物的產(chǎn)量可能引起負(fù)效應(yīng)的這一問(wèn)題，利用Ag2這種草甘膦脅迫誘導(dǎo)啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)epsps基因，只在草甘膦噴施后高效表達(dá)對(duì)草甘膦的抗性。另外，同時(shí)利用具有組織特異性的啟動(dòng)子RuBP，使epsps基因在植物草甘膦農(nóng)藥田間噴施主要部位葉片中高效表達(dá)，應(yīng)可以進(jìn)一步增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植物的抗草甘膦能力，但又不致過(guò)多地增加轉(zhuǎn)基

2、因植物的代謝負(fù)擔(dān)，以利培育高抗草甘膦且農(nóng)藝性狀優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因植物。 因此，本文分別以pB1121-E-M-Bt(Kanar)和pB1121-CP4E(Kanar)質(zhì)粒為基礎(chǔ)，通過(guò)載體pUC19及對(duì)EcoR I位點(diǎn)的接頭改造，構(gòu)建了由RuBP啟動(dòng)子和新發(fā)現(xiàn)的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子Ag2共同調(diào)控epsps基因的植物表達(dá)載體pGBI-Ag2EM-RuBPEM和pGBI-Ag2CP4E-RuBPCP4E，選擇標(biāo)記為卡那霉素，通過(guò)凍融法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入