雞胚胎原始生殖細胞慢速冷凍和玻璃化冷凍保存.pdf

1、揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文雞胚胎原始生殖細胞慢速冷凍和玻璃化冷凍保存姓名：韓威申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：陳國宏;李碧春20060501揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文 2I V ：1 0 ％D M S 0 + 1 0 ％E G + 0 ．5 m o l 幾蔗糖+ 2 0 ％F B S + D M E M ：V ：2 0 ％E G + 0 ．5 m o l ／L 蔗糖+ 2 0 ％F B S + D M E M ；V I ：2 0

2、 ％D M S O + 0 ．5 m o l ／L 蔗糖+ 2 0 ％F B S + D M E M液氮中凍存2 周后，取出冷凍樣本，投入3 7 ～3 8 0 c 水浴中復(fù)蘇，復(fù)蘇后P G C s 臺盼藍染色測定細胞存活率，體外接種培養(yǎng)、傳代。對傳至第3 代的慢速冷凍P G C s和傳至第2 代的玻璃化冷凍P G C s ，進行P A S 特異性染色、A K P 染色及核型分析鑒定。旨在探討兩種冷凍保護體系對雞胚胎P G C s 的冷凍

3、保護效應(yīng)，以期建立完整、可行的雞胚胎P G C s 細胞冷凍保存體系。結(jié)果如下：1 ．慢速冷凍程序下P G C s 復(fù)蘇后活率：第1 9 期雞胚胎P G C s 慢速冷凍復(fù)蘇后活率在冷凍保護液V ( 1 0 ％E G + 1 0 ％F B S + 0 ．1 m o l ／L 蔗糖+ D M E M ) 下最高，為9 2 ．2 0％，且與冷凍保護液I 的復(fù)蘇后活率( 8 8 ．3 0 ％) 之間差異顯著( 尸 0 ．0 5 ) 。2 ．玻

4、璃化冷凍程序下P G C s 復(fù)蘇后活率：冷凍保護液I( 1 0 ％D M S O + 1 0 ％E G + 1 0 ％P V P ) 最適合第1 9 期和第2 8 期雞胚胎P G C s 的冷凍保存，復(fù)蘇后活率分別為8 4 ．1 5 ％和8 2 ．7 9 ％，且與其余5 種冷凍保護液下復(fù)蘇后活率之間差異均極顯著( PO ．0 5 ) ；在冷凍保護液V 和冷凍保護液V I 下復(fù)蘇后活率分別為7 1 ．1 1％、6 9 ．9 1 ％，兩者

5、之間差異顯著( P < 0 ．0 5 ) ，其余各冷凍保護液下復(fù)蘇后活率之間差異均極顯著( J P < O ．0 1 ) 。第2 8 期雞胚胎P G C s 玻璃化冷凍復(fù)蘇后，在冷凍保護液I v 和冷凍保護液v 下復(fù)蘇后活率分別為7 7 ．3 9 ％、7 3 ．9 6 ％，兩者之問差異顯著( P < O ．0 5 ) ；在冷凍保護液I I I 下復(fù)蘇后活率為7 6 ．2 8 ％，與冷凍保護液I V ( 7 7 ．3 9