血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中的作用研究.pdf

1、第一部分人病理性瘢痕組織及小鼠創(chuàng)傷愈合過(guò)程中存在EnMT
　　 目的:觀察人病理性瘢痕組織中是否存在EnMT;觀察小鼠創(chuàng)傷愈合過(guò)程中是否存在EnMT,及其在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中的表達(dá)情況。
　　 方法:臨床收集人病理性瘢痕組織及正常皮膚各10個(gè)標(biāo)本,將標(biāo)本制成石蠟切片,通過(guò)免疫熒光方法檢測(cè)FⅧ和α-SMA表達(dá)變化。選取雄性4～6周齡昆明系小鼠48只,建立背部正中近頸側(cè)皮膚1.5×1.5cm2的全層切創(chuàng)傷模型,分別于傷后3、5、

2、7、9、12和14d隨機(jī)處死8只小鼠并切取創(chuàng)面及創(chuàng)沿組織,8只未造模小鼠切取正常皮膚作為對(duì)照組,每組標(biāo)本取4個(gè)制成冰凍切片,4個(gè)標(biāo)本采用消化法分離培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞,應(yīng)用免疫熒光方法檢測(cè)冰凍切片及分離培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞FⅧ和α-SMA表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示病理性瘢痕組織及創(chuàng)傷愈合過(guò)程中均存在FⅧ、α-SMA雙陽(yáng)性細(xì)胞。創(chuàng)傷愈合過(guò)程中,正常對(duì)照組皮膚存在少量FⅧ、α-SMA雙陽(yáng)性細(xì)胞。創(chuàng)傷組創(chuàng)后第3、5、7、9d和

3、對(duì)照組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01),雙陽(yáng)性細(xì)胞在FⅧ陽(yáng)性細(xì)胞中比例呈單峰趨勢(shì),即在第7d時(shí)雙陽(yáng)性細(xì)胞比例達(dá)到峰值,創(chuàng)后第12d后基本恢復(fù)正常水平(p＞0.05)。
　　 結(jié)論:病理性瘢痕組織及創(chuàng)傷愈合過(guò)程中均存在EnMT,且在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中EnMT的表達(dá)呈單峰趨勢(shì)。
　　 第二部分 TGF-β1對(duì)HUVECs的促EnMT作用研究
　　 目的:觀察不同濃度TGF-β1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的促EnMT作用影響,探討En

4、MT在病理性瘢痕形成和創(chuàng)傷愈合過(guò)程中的作用機(jī)制。
　　 方法:分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,采用不同濃度的TGF-β1(10、25、和50 ng/ml)刺激細(xì)胞72h后,倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)變化,免疫熒光方法檢測(cè)FⅧ和α-SMA表達(dá)變化,RT-PCR檢測(cè)VE-鈣粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型膠原基因表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:正常對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞呈鋪路石樣生長(zhǎng),TGF-β1刺激組內(nèi)皮細(xì)胞由鋪路石樣形態(tài)向

5、梭形轉(zhuǎn)化。免疫熒光檢測(cè)可見(jiàn)對(duì)照組含有少量FⅧ,α-SMA的雙陽(yáng)性細(xì)胞。TGF-β1組α-SMA,FⅧ雙陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多,并且具有明顯的濃度依賴性(P＜0.05,P＜0.01)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,TGF-β1刺激導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記物VE-鈣粘蛋白(VE-cadherin)基因的表達(dá)顯著減少(P＜0.05),隨著TGF-β1刺激濃度的增加,VE-鈣粘蛋白基因表達(dá)呈明顯的下降趨勢(shì);相反,內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)性標(biāo)記物α-SMA和Ⅰ型膠原基因