土芽孢桿菌TS3-9胞外多糖的初步研究.pdf

1、微生物胞外多糖具有植物多糖、動物多糖不具備的優(yōu)良特性，如化學(xué)結(jié)構(gòu)單純，生產(chǎn)周期短，不受季節(jié)、地理和病蟲害等其他因素的限制，能滿足廣泛使用的要求，也是至今研究得比較詳細的一類多糖。極端嗜熱微生物作為微生物中較為特殊的一類菌屬，產(chǎn)生的胞外多糖因其新穎的結(jié)構(gòu)特征和化學(xué)性質(zhì)而受到了廣泛的關(guān)注，并在眾多食品，醫(yī)藥領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用。深入對極端嗜熱微生物胞外多糖的研究，將開發(fā)出更為可觀的潛在應(yīng)用價值。本實驗對篩選自氡溫泉水耐輻射的嗜熱土芽孢桿菌Ge

2、obacillusTS3-9所產(chǎn)胞外多糖進行了發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化，分離純化，結(jié)構(gòu)研究以及生物活性的評價。所得研究結(jié)果如下:
　　 采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化了胞外多糖發(fā)酵過程中碳源、氮源和無機鹽選擇對多糖產(chǎn)量的影響。首先通過單因素分析法得到了影響較明顯的碳源、氮源和無機鹽成分，在此基礎(chǔ)上通過Plackett-Burman設(shè)計法和中心組合實驗對培養(yǎng)基組成進行了優(yōu)化，得到最終優(yōu)化條件為:乳糖(2.1％)，胰蛋白胨(1.3％)，酵母膏(1.1

3、％)。胞外多糖的產(chǎn)量達91.6mg/L，大幅提高了多糖產(chǎn)量。
　　 通過乙醇沉淀法，Sevage除蛋白法，透析法，柱層析法對多糖提取工藝，除蛋白效率，純化工藝進行優(yōu)化。實驗結(jié)果表明提取過程中乙醇的添加量與發(fā)酵液量的體積比為3∶1;Sevage法除蛋白次數(shù)以3次最佳，最終蛋白含量最低為16.3％，糖含量為41.0％;透析可有效除去多糖中小分子雜質(zhì);經(jīng)DEAESepharoseFF層析柱NaCl梯度洗脫確定得到酸性組分多糖AEPS，

4、再經(jīng)過SephadexG-200層析柱收集得純多糖樣品，通過高效液相凝膠滲透色譜法檢測為單一組分，分子量為3.2×106Da。
　　 采用化學(xué)法分析得到純多糖糖醛酸含量為18.6％，乙?；?.1％，傅立葉紅外變換分析初步確定了AEPS作為多糖物質(zhì)所具備的特征官能團以及吡喃糖環(huán)、乙酰氨基(-NHCOCH3)取代基的存在;氣相色譜分析表明AEPS為含有3種單糖的雜多糖，組成為甘露糖、葡萄糖和鼠李糖，其摩爾比為16.7∶2.4∶1