甜菜M14品系pBI-Pbm-BvM14-MADSbox載體的構(gòu)建及BvM14-CMO、BvM14-BADH鹽脅迫應(yīng)答分析.pdf

1、甜菜M14品系是由野生白花甜菜(BetacorollifloraZoss.)和二倍體栽培甜菜(BetavulgariL.)通過種間雜交及回交得到的附加白花甜菜9號染色體的單體附加系。M14品系具有兼性無融合生殖的特性，是尋找優(yōu)質(zhì)基因難得的試驗材料。
　　 實驗室前期通過差異顯示技術(shù)和抑制消減雜交技術(shù)從甜菜M14品系中獲得了特異表達基因BvM14-MADSbox的cDNA全長。王玉婷已通過染色體步移獲得BvM14-MADSbox基

2、因的上游序列，通過PCR獲得基因啟動子的序列，初步定名為Pbm，并通過啟動GUS報告基因的表達初步驗證了Pbm的啟動效率。
　　 本試驗利用已獲得的BvM14-MADSbox基因特異啟動子序列設(shè)計帶有HindⅢ、XbaⅠ酶切位點的PCR引物，構(gòu)建BvM14-MADSbox基因特異啟動子Pbm的pBI/Pbm/BvM14-MADSbox表達載體。
　　 甜菜M14品系BvM14-CMO基因是鹽誘導(dǎo)表達基因，通過同源序列克隆

3、法，克隆出BvM14-CMO的cDNA片段。生物信息學(xué)分析該基因全長1341bp，編碼446個氨基酸。后續(xù)工作以該基因作為研究甜菜M14品系參與脅迫反應(yīng)的應(yīng)答基因之一。
　　 甜菜M14品系經(jīng)本實驗室前期研究具有較強的耐鹽性，可以在500mmol/LNaCl脅迫處理下生長良好。本研究以甜菜M14品系的苗期為研究材料，對其進行了0、200、400mmol/L不同NaCl濃度脅迫處理24h后，對合成甜菜M14品系甜菜堿的BvM14-

4、CMO、BvM14-BADH基因進行了實時定量PCR研究發(fā)現(xiàn):甜菜M14品系葉片中兩基因在不同濃度NaCl脅迫處理下相對表達量一致，隨著濃度的增加，且呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，在200mmol/LNaCl脅迫處理下兩者相對表達量最低;甜菜M14品系根中BvM14-CMO、BvM14-BADH的相對表達量一致，隨著濃度的增加，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，并且在200mmol/LNaCl脅迫處理下達到最高。同時采用比色法測定了不同濃度NaCl脅迫