雙丹組分丹酚酸B與丹皮酚對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠的機(jī)制研究.pdf

1、目的：以傳統(tǒng)中藥復(fù)方雙丹制劑的有效活性成分丹酚酸B(SalB)和丹皮酚(Pae)為基礎(chǔ)，采用基線等比增減法進(jìn)行配伍設(shè)計(jì)，觀察不同配比組合對(duì)體外實(shí)驗(yàn)離體血管舒張和心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響，同時(shí)觀察不同配比組合對(duì)急性心肌缺血再灌注損傷（MI/RI）模型的影響，并最終獲得SalB/Pae對(duì)MI/RI最佳保護(hù)配比組合；同時(shí)通過Western blot方法觀察SalB/Pae最佳配比組合對(duì)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素的干預(yù)作用，從而希望為研制出機(jī)理

2、和適應(yīng)癥相對(duì)較明確的新型中藥復(fù)方提供一些研究思路和方法。
　　 方法：本文主要在整體、器官、細(xì)胞和分子水平上探討了SalB/Pae對(duì)MI/RI的影響；采用離體血管舒張實(shí)驗(yàn)觀察Pae/SalB的不同配比組合對(duì)SD大鼠離體血管舒張程度的影響；細(xì)胞水平上主要比較SalB/Pae的不同配比組合對(duì)原代心肌細(xì)胞缺氧再?gòu)?fù)氧損傷的影響，培養(yǎng)36h時(shí)可觀察到明顯心肌細(xì)胞搏動(dòng)，此時(shí)開始進(jìn)行缺氧1h和再?gòu)?fù)氧3h模擬缺血再灌注損傷，缺氧損傷前3小時(shí)分別

3、加入不同配比組合，觀察心肌細(xì)胞的活力、細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞內(nèi)MDA表達(dá)水平；再采用急性心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)分別比較不同配比組合對(duì)急性MI/RI的影響，ip給藥連續(xù)3d，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，缺血30min后再灌注120min，分別比較SalB/Pae不同配比組合對(duì)SOD， MDA， NO， CK-MB，心肌梗死面積，心電∑-ST和組織形態(tài)等的影響；并通過Western bl ot檢測(cè)了SalB/Pae最佳配比對(duì)SD大鼠急性心肌缺血再灌注損

4、傷中起始損傷黏附關(guān)鍵介導(dǎo)分子P-選擇素的表達(dá)的變化，以探討SalB/Pae對(duì)MI/RI的可能保護(hù)作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1．離體血管舒張實(shí)驗(yàn)：SalB和Pae不同配比組合對(duì)大鼠離體血管均具有明顯的舒張作用，與SalB/Pae4／0及0／4組比較，3／1和2／2組合對(duì)大鼠離體血管都有明顯舒張作用，其中以3／1舒張效果最佳。
　　 2．原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)缺氧再?gòu)?fù)氧損傷實(shí)驗(yàn)：SalB， Pae和SalB/Pae(

5、3／1)分別在濃度為1mg·mL-1，100μg·mL-1，10μg·mL-1，1μg·mL-1時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞的損傷有一定的保護(hù)作用，在SalB/Pae(3／1)濃度為10μg·mL-1時(shí)MTT測(cè)得心肌細(xì)胞活力最高；在SalB， Pae和SalB/Pae(3／1)濃度分別為1mg·mL-1，100μg·mL-1，10μg·mL-1，1μg·mL-1時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞凋亡有一定的保護(hù)作用，當(dāng)SalB/Pae(3／1)濃度為10μg·mL-1時(shí)細(xì)胞

6、凋亡程度最低：在SalB/Pae(3／1)濃度分別為100μg·mL-1，10μg·mL-1時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞MDA的降低作用最明顯。
　　 3．急性心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)：各不同配比組合與模型組相比較，梗死程度均低于模型組；組間比較，SalB/Pae3／1組和1／1組分別與丹酚酸B單方組和丹皮酚單方組具有顯著性差異，梗死程度都低于丹酚酸B單方組和丹皮酚單方組，其中以SalB／Pae3:1組效果梗死程度最低；心電∑-ST、 MDA和C

7、K-MB觀察結(jié)果顯示SalB/Pae3:1組低于其它組別，NO和SOD觀察結(jié)果顯示SalB/Pae3:1組明顯高于其它組別。
　　 4．Western blot: Western blot結(jié)果進(jìn)一步顯示，與模型組比較，最佳配比組合組結(jié)果顯示SalB/Pae(3／1)組P-選族素表達(dá)較低，模型組P-選擇素表達(dá)明顯高于假手術(shù)組，差異顯著。
　　 結(jié)論
　　 1、丹皮酚和丹酚酸B配比組合對(duì)大鼠離體血管的舒張和原代心肌細(xì)

8、胞缺氧再?gòu)?fù)氧損傷都具有一定的保護(hù)作用，且配比組合的保護(hù)效果優(yōu)于各單方組的保護(hù)效果；
　　 2、丹皮酚和丹酚酸B配比組合對(duì)大鼠的急性心肌缺血再灌注損傷有明顯保護(hù)作用，在丹酚酸B和丹皮酚之比為3:1時(shí)保護(hù)效果最佳，這說明丹酚酸B和丹皮酚兩者在保護(hù)大鼠急性心肌缺血再灌注損傷方面可能存在某種協(xié)同或相加作用。
　　 3、丹皮酚和丹酚酸B配比組合對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷過程中P-選擇素也具有一定的調(diào)節(jié)作用，這說明其保護(hù)作用機(jī)制可能與