枇杷屬植物的遺傳多樣性分析和指紋圖譜初步構(gòu)建.pdf

1、枇杷（Eriobotryajaponica）起源于我國(guó)。其秋萌冬花、春實(shí)夏熟，在百果中獨(dú)具先天四時(shí)之氣，被譽(yù)為獨(dú)冠時(shí)新的嘉果珍味，是我國(guó)南方特產(chǎn)的常綠果樹(shù)。枇杷屬植物約有30個(gè)種，主要分布于南緯或北緯20°-35°之間，其中原產(chǎn)于中國(guó)的有21個(gè)種類（包括種、變種和變型）。我國(guó)是世界枇杷主要生產(chǎn)國(guó)家，栽培品種眾多，種質(zhì)資源十分豐富。因此，研究枇杷屬植物的遺傳多樣性和構(gòu)建指紋圖譜，對(duì)枇杷資源的保存利用、品種的鑒定與資源創(chuàng)新、分子輔助育種等有

2、重要的參考價(jià)值和指導(dǎo)意義。
　　 本試驗(yàn)利用磁珠微衛(wèi)星富集法開(kāi)發(fā)的枇杷SSR引物和本實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)及前人報(bào)道的SCoT引物，對(duì)67份枇杷屬種質(zhì)資源進(jìn)行研究。建立并優(yōu)化枇杷屬植物的SSR-PCR和SCoT-PCR反應(yīng)體系;對(duì)供試材料的遺傳多樣性進(jìn)行分析，并利用SSR標(biāo)記構(gòu)建部分種質(zhì)資源的指紋圖譜。主要結(jié)果如下:
　　 1、本文建立并優(yōu)化了枇杷的SSR-PCR和SCoT-PCR反應(yīng)體系。結(jié)果表明:(1)枇杷SSR-PCR最佳反應(yīng)

3、體系（20μL）:Mg2+1.563mmol·-1、dNTPs0.05mmol·L-1、Taq酶0.75U、Primer0.750μmol·L-1、模板DNA40ng。(2)枇杷SCoT-PCR最佳反應(yīng)體系(20μL):Mg2+1.875mmol·L-1、dNTPs0.35mmol·L-1、Taq酶2.00U、Primer0.875μmol·Lq、模板DNA10ng。
　　 2、本試驗(yàn)所用的枇杷SSR引物的多態(tài)信息含量(PIC)

4、普遍較高，介于0.30-0.74之間，平均為0.44，表明這些微衛(wèi)星DNA座位均表現(xiàn)為中度、高度多態(tài)。說(shuō)明該SSR引物在枇杷屬植物的研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
　　 3、從59對(duì)SSR引物中篩選出17對(duì)多態(tài)性高、效果良好、結(jié)果穩(wěn)定的引物用于分析。17對(duì)引物在供試材料中共擴(kuò)增出53條條帶，每對(duì)引物擴(kuò)增2至6條條帶，平均3.12條。這些引物在67份枇杷材料中檢測(cè)到的遺傳多樣性參數(shù)差異較大。所有供試材料的觀察等位基因數(shù)平均為3.12;

5、有效等位基因數(shù)平均為2.17;Nei's基因多樣性在平均為0.51;Shannon信息指數(shù)平均為0.82;觀測(cè)雜合度平均為0.64;期望雜合度平均為0.51。供試材料間的(Dice)遺傳相似系數(shù)介于0.53-1.00之間，平均相似系數(shù)0.765。這表明供試材料的遺傳背景較為復(fù)雜，遺傳多樣性豐富。
　　 4、從30條SCoT單引物中篩選出15條多態(tài)性高、效果良好、結(jié)果穩(wěn)定的引物用于試驗(yàn)。15條引物在供試材料中共擴(kuò)增出88條條帶，每

6、對(duì)引物擴(kuò)增4至9條條帶，平均4.93條，其中多態(tài)性條帶74條，多態(tài)性條帶比率高達(dá)84.09％。15條SCoT引物在所有供試材料的觀察等位基因數(shù)平均為1.86;有效等位基因數(shù)在平均為1.55;Nei's基因多樣性平均為0.31;Shannon信息指數(shù)平均為0.46。這也表明供試材料的遺傳背景比較豐富。
　　 5、兩種標(biāo)記分析均表明，相對(duì)于櫟葉枇杷與普通枇杷的親緣關(guān)系，大渡河枇杷更接近普通枇杷。枇杷栽培品種也沒(méi)有因果肉的顏色而分別聚

7、類。興寧一號(hào)與早鐘6號(hào)相似系數(shù)很高，可能是同物異名。安徽和浙江的栽培品種“大紅袍”相似性較低，初步認(rèn)為二者是同名異物。
　　 6、通過(guò)分析本試驗(yàn)的17對(duì)SSR引物對(duì)67份枇杷種質(zhì)資源的擴(kuò)增結(jié)果，利用CDPP725-03/04、CDPP725-27/28、CDPP725-39/40、LM3、LM15和LM34等6對(duì)SSR引物的條帶組合，采用人工繪制品種鑒別示意圖方法(manualcultivaridentificationdiag