Graves病差異表達(dá)基因全長cDNA序列的克隆與生物信息學(xué)分析.pdf

1、目的:在已獲得的Graves病差異低表達(dá)基因片段(EST：CF569048)的基礎(chǔ)上應(yīng)用SMARTTMRACE技術(shù)獲得其全長cDNA序列(TGDRF12)。 　　方法:在本文前期運(yùn)用抑制消減雜交技術(shù)(SSH)獲得Graves病差異低表達(dá)基因片段(EST：CF569048)的基礎(chǔ)上，對EST進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并應(yīng)用SMARTTMRACE技術(shù)分別獲得Graves病差異表達(dá)基因的5'端和3'端，將測序結(jié)果去除載體后拼接成全長cDNA序列。

2、將獲得的全長序列到相關(guān)站點(diǎn)分析其閱讀框架、進(jìn)行同源性比較和相關(guān)的生物學(xué)功能分析。并應(yīng)用MultipleTissueNorthernBlot檢驗(yàn)其在正常人多種組織的表達(dá)。將獲取的新序列利用Sequin程序進(jìn)行登錄到Genbank。 　　結(jié)果:應(yīng)用SMARTTMRACE技術(shù)成功獲得Graves病差異低表達(dá)基因的一條全長cDNA序列。此cDNA全長1620bp，開放閱讀框架318bp，5'非編碼區(qū)序列78bp，3'非編碼區(qū)序列1224bp，

3、共編碼106個(gè)氨基酸。MultipleTissueNorthernBlot檢驗(yàn)其在正常人3種組織(胃、甲狀腺、腎上腺)中有較高表達(dá)，其中甲狀腺最高，且都只有一個(gè)轉(zhuǎn)錄本(1.6kb)，顯示大小為1.6Kb左右。同源性分析表明其與蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員有很高的同源性。本文利用Sequin程序進(jìn)行登錄，被GenBank收錄于Nr數(shù)據(jù)庫中(accessionnumber：AY786414)，見附錄四。 　　結(jié)論:通過應(yīng)用SMARTTM