RUNX3對(duì)BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響.pdf

1、目的：研究和確認(rèn)RUNX3對(duì)BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響。
　　方法：BMP9腺病毒感染間充質(zhì)干細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)內(nèi)源性Runx3的基因水平，通過(guò)Western Blot檢測(cè)內(nèi)源性RUNX3蛋白的表達(dá)。構(gòu)建過(guò)表達(dá)RUNX3(Ad-RUNX3)和干擾RUNX3（Ad-siRUNX3）的腺病毒，通過(guò)RT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證。利用過(guò)表達(dá)RUNX3(Ad-RUNX3)和干擾RUNX3腺病毒(Ad-s

2、iRUNX3)處理間充質(zhì)干細(xì)胞，通過(guò)堿性磷酸（ALP）染色和活性定量測(cè)定，檢測(cè)成骨早期指標(biāo)ALP；用茜素紅S染色，檢測(cè)成骨晚期指標(biāo)鈣鹽沉積。同時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)RUNX3對(duì)BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和周期的影響。利用RT-qPCR檢測(cè)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Id1、Id2、Dlx5和Runx2的基因表達(dá)；利用Western Blot檢測(cè)DLX5和RUNX2的蛋白表達(dá)；通過(guò)Western Blot檢測(cè)RUNX3對(duì)經(jīng)典的BMPs/Smad信號(hào)通

3、路中Smad1/5/8和非經(jīng)典的MAPK信號(hào)通路中p38和ERK1/2的變化。
　　結(jié)果：BMP9可以使MSCs中RUNX3基因和蛋白表達(dá)升高（p<0.05）；過(guò)表達(dá)和干擾RUNX3都可以增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的早期成骨指標(biāo)ALP活性，增加S期細(xì)胞的比例以及上調(diào)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Id1和Id2的基因表達(dá)（p<0.05）；過(guò)表達(dá)RUNX3可以增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的晚期成骨指標(biāo)鈣鹽沉積，而干擾RUNX3可以抑制BMP9誘導(dǎo)的晚期成骨指標(biāo)鈣鹽沉積。

4、過(guò)表達(dá)RUNX3促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子DLX5和RUNX2的基因和蛋白表達(dá)，干擾RUNX3抑制DLX5和RUNX2的基因和蛋白表達(dá)（p<0.05）。過(guò)表達(dá)RUNX3促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8的磷酸化，干擾RUNX3抑制BMP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8的磷酸化，對(duì)總的Smad1/5/8蛋白水平無(wú)影響。RUNX3不影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的p38、ERK1/2的磷酸化水平。
　　結(jié)論：RUNX3在調(diào)控BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干