植酸酶基因線(xiàn)性化片段轉(zhuǎn)化大豆的研究.pdf

1、本論文的研究目的是利用基因工程手段培育具有生物安全性的轉(zhuǎn)植酸酶基因大豆，使其降解植酸，釋放無(wú)機(jī)磷，從而使轉(zhuǎn)基因大豆成為高附加值的動(dòng)物飼料，提高單胃動(dòng)物對(duì)磷的利用率，降低植酸磷對(duì)環(huán)境的污染。 本論文構(gòu)建了僅由外源植酸酶基因、調(diào)控序列以及兩側(cè)的邊界序列組成的線(xiàn)性化片段轉(zhuǎn)化元件，去除了選擇性標(biāo)記基因和載體骨架序列，并采用花粉管通道法對(duì)4個(gè)大豆品種進(jìn)行轉(zhuǎn)化，收獲162粒種子。PCR檢測(cè)99株植株，陽(yáng)性17株，陽(yáng)性率為17．2％。

2、 PCR產(chǎn)物測(cè)序與Southern—blot結(jié)果證明外源植酸酶基因已經(jīng)整合到大豆基因組中。RT—PCR和GUS組織化學(xué)染色結(jié)果說(shuō)明外源基因在植株內(nèi)實(shí)現(xiàn)了表達(dá)。 T2代和T3代植株進(jìn)行PCR擴(kuò)增和Southem—blot分析結(jié)果證明外源基因已在后代中得到遺傳。RT—PCR和植酸酶活性的初步測(cè)定說(shuō)明外源基因已在后代中實(shí)現(xiàn)了表達(dá)。 上述結(jié)果表明，無(wú)載體無(wú)選擇標(biāo)記基因線(xiàn)性化片段轉(zhuǎn)化大豆是可行的，解決了選擇標(biāo)記基因和載