人乳鐵蛋白基因遺傳轉(zhuǎn)化番茄的研究.pdf

1、該研究以番茄品種"強(qiáng)豐"的子葉為試驗(yàn)材料,研究了其組培再生體系,結(jié)果表明,MS十ZT2.0 mg/L十IAA0.2mg/L培養(yǎng)基的生芽率較高,達(dá)到68％左右.抗生素敏感性試驗(yàn)表明,適宜的卡那霉素篩選濃度是50mg/L.該研究分別構(gòu)建含人乳鐵蛋白基因高效植物表達(dá)載體質(zhì)粒pBIhLF(含kanr選擇標(biāo)記基因)和p1300UbihLF(無(wú)選擇標(biāo)記基因).pBIhLF的T-DNA區(qū)含有目的hlf基因和標(biāo)記kanr基因,hlf的啟動(dòng)子為35S啟動(dòng)

2、子;質(zhì)粒p1300UbihLF的T-DNA區(qū)僅含有目的基因hlf,hlf的啟動(dòng)子選用玉米Ubiquitin啟動(dòng)子.經(jīng)酶切、PCR鑒定表明:載體構(gòu)建正確,適合于番茄的遺傳轉(zhuǎn)化.采用凍融法將兩個(gè)表達(dá)載體分別導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105中.農(nóng)桿菌的不同預(yù)處理及轉(zhuǎn)化方法對(duì)番茄子葉遺傳轉(zhuǎn)化的研究表明:采用YEB液體培養(yǎng)基培養(yǎng),農(nóng)桿菌菌液濃度在OD600=0.8~1.0時(shí),侵染15min,轉(zhuǎn)化效率較高.共培養(yǎng)時(shí)加適量的乙酰丁香酮(AS,20 μ M)對(duì)轉(zhuǎn)