甘蔗內(nèi)生固氮細(xì)菌的分離、鑒定和生長特性.pdf

1、分類號墨魚魚：!UDC博士學(xué)位論文密級——甘蔗內(nèi)生固氮細(xì)菌的分離、鑒定和生長特性’邢永秀學(xué)科專業(yè)佳塑越量堂量趲往堂指導(dǎo)教師揚廈洼麴援論文答辯日期2QQ魚生魚旦3目學(xué)位授予日期答辯委員會主席渣太仨麴握論文評閱人船ItophiIia)，PCR擴(kuò)增其16SrDNA全序列分別是1455bp、1444bp、1460bp鞫(GenBank的蹩錄號分剮為DQ466570、DQ466574、D0141193)：B8S、B8LH是根癌土壤桿菌(Agrob

2、acteriumtumefaciensJ，PCR擴(kuò)增出其16SrDNA全序列共1403bp秘1339bp(GenBank的登錄號為AY850392和DQ466575)。2不同甘蔗的不同部位分離所得分離物的圈氮酶活性差異較大，本地品種中除了ROCl6和GTll蕉中的分離物的閹氮酶活性較高外，其他幾個甘蔗品種巾分離所得到的分離物的固氮酶活性都較低，而從巴西引進(jìn)的甘蔗品種巾分離到的菌株固氮酶活性都較高，這霹能與巴西甘蔗品種整體上的固氮能力就比

3、本地品種高有關(guān)。3不目的培養(yǎng)基對營蔗固氮蓉的分離種類和固氮酶活性的彩晌較大。4無論是廣囂主栽的曹蔗品種，還是從巴疆號I進(jìn)的具毒圈氦能力的甘蔗品種，在廣西的栽培條件和氣候條件下，在不同甘蔗的不同部位，我們都分離到可在無氮培養(yǎng)基上生長的菌株，進(jìn)一步利用乙炔還原法證明，大多數(shù)菌株具有固氮酶活性。證明寫I進(jìn)的巴西品種在本地的條件下，仍可保持其固氮活性。囤氮特性在組培苗后代中的表現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，在整株甘蔗組培苗中我們未檢測到固氮酶活性，但從幾個甘蔗品種的

4、緞培苗中卻分離到具有固氮酶活性的菌株，且?guī)讉€分離物的固氮酶活性都較高。5從巴西弓l進(jìn)的苜蔗品種，應(yīng)用2號墻養(yǎng)基與3號培養(yǎng)基未分離到已有報道的幾個典型菌株，如ADiazotroph丘rubrisuba／b／cans攔seropedicaeBurkholderiasp等這些在巴西首蔗體內(nèi)大量存在的固氮菌，可能與廣西的栽培條件或氣候條件有關(guān)。而從本地甘蔗的品種審我們分離到7一些國氮酶活性較高的蓉株，如B16SA、B16SH、B9LA、B8S、

5、B11s等，這表明甘蔗體內(nèi)固氮微生物的存在可能是一個普遍的現(xiàn)象，只羆由于我們的栽培措施或環(huán)境條件的不同而影響了甘蔗內(nèi)生圈氮菌作用的發(fā)揮。6在甘蔗的生長盛期，以甘蔗品釉B、83、B4、B8、B9、B16為材料，對甘蔗不問部位的內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量分析發(fā)現(xiàn)，除了B16品種莖中分離到的細(xì)菌數(shù)量較多外，其他幾個供試品釉都是臥巾的細(xì)菌數(shù)量大于莖中的細(xì)菌數(shù)壁，葉中的細(xì)菌數(shù)量都在106數(shù)量級，而莖中細(xì)菌數(shù)量卻較少。嗣時發(fā)現(xiàn)，若不采用富集培養(yǎng)方法，要獲得分離