18-β-甘草酸的輻射防護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討18-β-甘草酸（GL）及其活性代謝物18-β-甘草次酸（GA）的輻射損傷防護(hù)作用及產(chǎn)生這種作用可能的機(jī)制；補(bǔ)中益氣丸（BY）復(fù)方中非甘草酸組分對(duì)甘草酸藥代動(dòng)力學(xué)行為的影響；同時(shí)研究了輻射損傷對(duì)GL及GA在小鼠體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)的影響。
　　方法：分離培養(yǎng)C57BL/6小鼠原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞， CCK-8法測(cè)定GL細(xì)胞毒性，12Gy60Coγ射線一次性照射,24 h測(cè)定細(xì)胞內(nèi)SOD活性、RT-PCR檢測(cè)候選靶基因表達(dá)量，W

2、estern Blot檢測(cè)Tnfaip-2蛋白表達(dá)量變化；C57BL/6小鼠3Gy照射后腹腔注射GL，3、6、10 d后測(cè)定其全骨髓細(xì)胞中靶基因表達(dá)量。大小鼠腹腔注射或灌胃給予GL和BY；正常及輻射小鼠腹腔注射或灌胃給予GL。建立LC-MS/MS方法測(cè)定大小鼠血漿中GL和GA的濃度，血漿樣品經(jīng)液液萃取或蛋白沉淀處理后用反相C8色譜柱分離， TSQQuantum質(zhì)譜儀定量。采用Das2.0軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，Prism5.0軟件編輯圖

3、片，SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：GL及GA可明顯提高小鼠MSC中SOD活性；GL可明顯增加小鼠MSC中Tnfaip2的表達(dá)，降低Sv2a表達(dá)；小鼠全骨髓細(xì)胞中， GL在短時(shí)間內(nèi)升高Tnfaip2表達(dá)量均，而10天后呈相反趨勢(shì)；GL可使Tnfaip-2蛋白表達(dá)量升高。結(jié)果顯示GL檢測(cè)方法各指標(biāo)均符合方法學(xué)要求；與GL組相比， BY組中GA的達(dá)峰濃度（Cmax）和時(shí)間-濃度曲線下面積（AUC）分別降低了56％和76％；

4、腹腔注射相同劑量的GL后，輻射組小鼠體內(nèi)GL的AUC0–t和Cmax僅為對(duì)照組的24.5％及46.1％，而GA僅Tmax有明顯差異；而灌胃相同劑量的GL后，輻射組小鼠與正常小鼠相比， GL各參數(shù)均無明顯差異，而輻射組GA的AUC0–t和Cmax僅為對(duì)照組的29.6％及34.2％。
　　結(jié)論：提示GL輻射防護(hù)作用可能是通過增加體內(nèi)SOD活性、調(diào)節(jié)體內(nèi)炎癥因子Tnfaip2而實(shí)現(xiàn)的。BY復(fù)方中的其他成分可抑制甘草酸的口服吸收過程；輻射