玉米部分ZmCBL基因的克隆及其轉(zhuǎn)化擬南芥.pdf

1、干旱、低溫和高鹽等非生物脅迫嚴(yán)重影響植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)類(lèi)鈣調(diào)磷酸酶B蛋白(calcineumin B-like proteins，CBLs)家族在植物對(duì)多種非生物脅迫的應(yīng)答反應(yīng)中起著重要調(diào)節(jié)作用。玉米基因組中至少有9個(gè)CBL編碼基因，本研究克隆了其中三個(gè)成員，即ZmCBL2-2、ZmCBL6和ZmCBL8的編碼區(qū)(openreading frame，ORF)cDNA，并將其構(gòu)建到植物表達(dá)載體、轉(zhuǎn)入擬南芥，為進(jìn)一步研究其功

2、能奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．利用RT-PCR．方法擴(kuò)增到玉米ZmCBL2-2、ZmCBL6和ZmCBL8基因的編碼區(qū)cDNA，它們分別含678、672和645個(gè)堿基對(duì)，推測(cè)的編碼蛋白分別由225、223和214個(gè)氨基酸殘基組成。
　　 2．通過(guò)生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)ZmCBL2-2、ZmCBL6和ZmCBL8蛋白都含有4個(gè)EF-hand結(jié)構(gòu)域，ZmCBL8還有一個(gè)N-豆蔻酰化位點(diǎn)；它們與水稻OsCBL2、O

3、sCBL6和OsCBL8氨基酸序列的一致性分別為93％、93％和78％;推測(cè)它們都是以親水性為主的可溶性蛋白，最可能定位在細(xì)胞質(zhì)中。
　　 3．將ZmCBL2-2、ZmCBL6和．ZmCBL8的編碼區(qū)cDNA，分別克隆到植物表達(dá)載體pCAMBIA3301的35S啟動(dòng)子之后，構(gòu)建成超表達(dá)載體，并通過(guò)凍融法將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞。
　　 4．用導(dǎo)八上述三個(gè)基因超表達(dá)載體的農(nóng)桿菌GV3101菌液轉(zhuǎn)化擬南芥野生